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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>蛋白提取與定量>>蛋白提取>> P4939細(xì)胞膜胞漿核膜蛋白分步提取試劑盒
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號P4939
品 牌NobleRyder/諾博萊德
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地北京市
更新時間:2025-03-14 17:54:08瀏覽次數(shù):27次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒 蛋白提取
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/100T |
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貨號 | P4939 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
主要用途 | 用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織 |
諾博萊德 細(xì)胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒
NobleRyder P4939 細(xì)胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒
產(chǎn)品貨號:P4939
產(chǎn)品名稱:細(xì)胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T
細(xì)胞膜胞漿核膜蛋白分步提取試劑盒
產(chǎn)品簡介:
中文名稱:細(xì)胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒
規(guī)格:50T ; 100T
儲存條件:2-8℃,1 year
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
細(xì)胞膜蛋白/胞漿蛋白/核膜蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織,如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組織中分步提取細(xì)胞膜蛋白/胞漿蛋白/細(xì)胞核膜蛋白/核內(nèi)蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內(nèi)完成。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份,包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
適用樣本:動物細(xì)胞
注:
1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3. 試劑拆封后請盡快使用完!
產(chǎn)品簡介:
細(xì)胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織,如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組織中分步提取細(xì)胞膜蛋白/胞漿蛋白/細(xì)胞核膜蛋白/核內(nèi)蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內(nèi)完成。
本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份,包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
自備試劑和儀器:
離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒,PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒,離心管、吸頭、一次性手套
產(chǎn)品特點(diǎn):
1、使用方便,從細(xì)胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2、將蛋白提取的時間縮短至 1 小時。
3、含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
4、紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
5、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
使用方法:
一、使用注意事項(xiàng):
1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
5. 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
8. 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
二、操作步驟
1. 提取液準(zhǔn)備:
每 400ul 冷的蛋白提取液 A/B/D 中都分別加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
2.取 5-10×106個細(xì)胞,在 4℃,800×g 條件下離心 5-10 分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干。
3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每 5×106個細(xì)胞中加入 400ul 冷的蛋白提取液 A,混勻后,在 4℃條件下用試劑盒所配針筒反復(fù)吸吹細(xì)胞,使細(xì)胞wan全破裂。
5. 在 4℃,1000×g 條件下離心 5 分鐘。
6. 將上清(I)吸入另一干凈離心管,在沉淀中加入 100-200μl 冷的提取液 B,高速渦旋振蕩 15 秒,充分混勻。
7. 將混勻的提取液 B 置 4℃低速振蕩 30-60 分鐘。
8. 將提取液 B 在 37℃條件下水浴 10 分鐘。
9. 將提取液 B 在 37℃下 1000-2000×g 離心 5 分鐘,此時溶液分為兩層(對著光線看),上層為核內(nèi)蛋白,下層是核膜蛋白約為 20-40μl。小心移除上層,用 1-2 倍體積的冰冷的提取液 D 溶解下層即為細(xì)胞核膜蛋白。
10. 在步驟 6 中所得到的上清(I)中加入 5μl 提取液 C,充分混勻。
11. 在 2-8℃振蕩 20-30 分鐘。
12. 在 37℃水浴 10 分鐘。
13. 在 37℃下,1000×g 離心 3 分鐘,此時溶液分為兩層,上層是胞漿蛋白部分,下層部分(II)是細(xì)胞膜蛋白約為 40-50μl。
14. 將上層小心吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到胞漿蛋白。
15. 用 50-150μl 冰冷的提取液 D 溶解步驟 13 中的下層部分(II),即得細(xì)胞膜蛋白。
16. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
常見問題分析:
1. 蛋白濃度低?
處理部分樣本時可能沒有裂解wan全,導(dǎo)致核蛋白/膜蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑 BC 的處理
時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
膜蛋白豐度較低,在條件允許的情況下,需要盡可能加大細(xì)胞的上樣量。
2. 用什么方法定量蛋白?
建議用 BCA 法。不適合用 Bradford 法,因?yàn)樵噭?A 中含有干擾 Bradford 法的組份,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用 Bradford 法定量。
3. 提取的蛋白具有活性嗎?
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
注意事項(xiàng):
1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。
3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛,應(yīng)立即用水沖洗
細(xì)胞膜胞漿核膜蛋白分步提取試劑盒
產(chǎn)品訂購信息:
P4939 細(xì)胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒 50T/100T
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