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孵育盒在免疫印跡實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用
閱讀：414 發(fā)布時(shí)間：2022-10-25
孵育盒采用物理分隔的方式將膜分格成小室，對應(yīng)待孵育抗體通過注液孔直接注入小室孵育，不需要額外的孵育盒或者雜交袋，更免去剪膜和反復(fù)做記號(hào)的麻煩，可整張膜進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果更完整和方便。
免疫印跡實(shí)驗(yàn)是目前實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行免疫檢測常用的實(shí)驗(yàn)方法之一。與ELISA實(shí)驗(yàn)方法相比，免疫印跡實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)流程更繁瑣，工作量更大，如果對多個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行檢測，通常是將轉(zhuǎn)印之后的膜一條條剪下，分別放入對應(yīng)的一抗小孵育盒子或者雜交袋；漂洗之后再分別加入對應(yīng)的二抗分別孵育；實(shí)驗(yàn)過程中需要在每張膜條上做標(biāo)記，其工作量相當(dāng)大，一旦標(biāo)記錯(cuò)誤或記錄錯(cuò)誤都會(huì)造成很麻煩。
一抗孵育：
1、打開孵育器，將孵育器的上蓋取下，底板放平，適當(dāng)調(diào)整膠墊位置處于中間位置，并用封閉液將膠墊表面潤濕；
2、將封閉好的整張膜（膜尺寸應(yīng)該小于膠墊尺寸），輕輕平鋪在膠墊上面，從一面輕輕趕走膠墊與膜之間的氣泡；
3、將孵育器的上蓋輕輕壓在膜上，將長方形液槽一面與膜接觸，膜上彩色Marker條帶置于對應(yīng)槽正中位置，均勻擰緊四角緊固螺絲（緊固到液孔槽加入液體不流出或者流串到其他液孔槽為宜），液孔槽與膜之間形成空腔液槽小室；
4、將對應(yīng)抗體工作液分別通過對應(yīng)液槽背面任意一端的注液孔輕輕注入液槽小室，抗體工作液一般的注入量不超過液槽小室總?cè)莘e的3／4；5、抗體工作液注入之后可將整個(gè)孵育器平放在搖床震蕩孵育（振幅不可過強(qiáng)），也可以平放在合適的溫度靜置孵育。