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預(yù)包被 96 孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測(cè)試劑 A

檢測(cè)試劑 B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB 底物

停止解決方案

封板機(jī)

37°C 培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液器以及無(wú)菌移液器吸頭

噴瓶或自動(dòng)洗板機(jī)

1.5 毫升管

蒸餾水

吸收性濾紙

100 ml 和 1 L 量筒

酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)：450 nm）

ELISA 搖床

血清：樣品應(yīng)收集到血清分離管中。將試管垂直放置，在 4°C 或室溫下放置長(zhǎng)達(dá) 60 分鐘，使其保持原樣，以凝固血清。以大約 1000 × g 離心 20 分鐘。立即或分裝分析血清并儲(chǔ)存在 -20°C 或 -80°C 下。

血漿：使用肝素或 EDTA 作為抗凝劑收集血漿。收集后 30 分鐘內(nèi)以 1000 × g 離心 15 分鐘。立即檢測(cè)或分裝并儲(chǔ)存在 -20°C 或 -80°C 下。 避免溶血和高膽固醇樣本。

組織勻漿：組織勻漿的制備會(huì)因組織類(lèi)型而異——這只是一個(gè)例子。用冰冷的 PBS 沖洗組織以去除多余的血液。均質(zhì)化前稱(chēng)重。將組織切碎，用組織勻漿器在 PBS 中的冰上勻漿，然后對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行超聲處理。將勻漿以 5000 × g 離心 5 分鐘并收集上清液。立即測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存在 -20°C 下。

1） 標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液制備標(biāo)準(zhǔn)品，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后按照方案中的說(shuō)明，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行連續(xù)稀釋。

2） 洗滌緩沖液：按照實(shí)驗(yàn)步驟中的說(shuō)明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3） 檢測(cè)試劑制備：計(jì)算所需工作溶液的總體積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1：100 的比例稀釋檢測(cè)試劑 A 和檢測(cè)試劑 B。

1） 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試樣品和對(duì)照孔。

2） 將 100 μl 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品分裝到標(biāo)準(zhǔn)孔中。

3） 將 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液緩沖液分裝到對(duì)照（零）孔中。

4） 將 100 μl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

5） 將 100 μl 檢測(cè)試劑 A 分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

6） 洗滌 3 次。

7） 將 100 μl 檢測(cè)試劑 B 分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 90 分鐘。

8） 洗滌 5 次。

9） 將 90 μl TMB 底物分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 10-20 分鐘。

10） 分裝 50 μl 終止液。

11） 測(cè)量 450 nm 處的 OD。