MagVigen™-鏈霉親和素磁性納米粒子可以通過鏈霉親和素和生物素之間的高親和力相互作用普遍結(jié)合任何生物素化的生物分子（例如抗體、蛋白質(zhì)、肽、DNA）。使用磁力架 (Cat#A20006) 可以輕松地將 MagVigen™-鏈霉親和素-生物素-生物分子復(fù)合物與未結(jié)合的生物素-生物分子分離。這提供了一種使用磁性納米顆粒標(biāo)記生物分子的快速而簡潔的方法。純化的納米顆粒-生物分子復(fù)合物可用于各種下游生物分離過程（例如蛋白質(zhì)純化、免疫沉淀、細(xì)胞分離或去除以及分子檢測）。
MagVigen™-鏈霉親和素非常適合與小鼠抗體一起使用，從組織或器官獲得的細(xì)胞群混合物中分離細(xì)胞（例如 CTC、干細(xì)胞）。分離的細(xì)胞具有活性，可以進(jìn)一步培養(yǎng)或用于下游分子分析，例如 mRNA 分離和 RT-PCR。使用 MagVigen™ 納米顆粒進(jìn)行細(xì)胞分離無需使用柱，因此細(xì)胞不會因穿過柱基質(zhì)而受到機(jī)械應(yīng)力。磁力分離的細(xì)胞高度純化并保留其活力，非常適合下游應(yīng)用。
輕松快速地制備納米顆粒-小鼠一抗偶聯(lián)物
簡單、溫和的細(xì)胞分離
強(qiáng)烈而持久的熒光信號
一致、高質(zhì)量的結(jié)果
高結(jié)合能力
高生物相容性
低非特異性結(jié)合
目錄號 21005C：MagVigen™-鏈霉親和素以含有 0.02% NaN3、0.02% BSA 的磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS) 形式提供。 pH 7.4。每瓶含有 1 ml 顆粒濃度為 2 mg/ml 的溶液，足以結(jié)合 10 9個細(xì)胞。
納米顆粒尺寸：200-500 nm，使用動態(tài)光散射測量。
多分散指數(shù)<0.2。
容量： 50μg生物素抗體/ml納米顆粒
目錄號 K21005C 還包括：
洗滌緩沖液
洗脫緩沖液
除磁鐵外的所有材料均應(yīng)儲存在 4°C 下。
保質(zhì)期：6個月
該方案提供了使用 MagVigen™-鏈霉親和素磁性納米粒子富集 10 5 -10 6細(xì)胞的一般指導(dǎo)。請根據(jù)具體應(yīng)用調(diào)整試劑用量。
使用前輕輕渦旋或移液管中的 MagVigen™-鏈霉親和素磁性納米顆粒。
等分 20-50 μl 納米顆粒溶液用于富集實(shí)驗(yàn)。
注意： 20-50 μl 通常足以富集 10 5 -10 6 個細(xì)胞。細(xì)胞捕獲效率可能受到多種因素的影響，例如細(xì)胞群中靶細(xì)胞的頻率、細(xì)胞表面表達(dá)的抗原/表位的密度以及抗體親和力。相應(yīng)地調(diào)整納米顆粒的量。
用 500 μl 洗滌緩沖液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在管的側(cè)面 1-2 分鐘，然后小心地除去上清液（磁鐵仍在側(cè)面），將納米顆粒與溶液分離。
將 1μg-2μg 生物素偶聯(lián)抗體（體積為 100-200 μl）添加到納米顆粒中，并在旋轉(zhuǎn)器上孵育 30-60 分鐘。
注： 50 μl 納米顆粒可結(jié)合約 2μg 抗體。
用 500 μl 洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結(jié)合的抗體。
將納米顆粒-抗體綴合物重懸于洗滌緩沖液 (50 μl) 中，并將其添加到細(xì)胞樣品中，使總體積為 0.1-0.5 ml。
將納米顆粒與細(xì)胞樣品在軌道搖床上室溫孵育 30 分鐘。
孵育后，使用磁鐵將納米粒子（與結(jié)合的細(xì)胞）從溶液中分離，并小心地除去上清液。
用500μl細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌納米粒子-細(xì)胞復(fù)合物兩次。
分離的細(xì)胞可以重懸于細(xì)胞培養(yǎng)基中以用于下游應(yīng)用。
注意： 洗脫緩沖液可用于從 MagVigen™-鏈霉親和素磁性納米顆粒中洗脫目標(biāo)蛋白或細(xì)胞。
MagVigen™ 納米顆粒能夠通過免疫沉淀測定來鑒定新的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，其中 MagVigen™ 鏈霉親和素生物素-抗體復(fù)合物可用于從測定樣品（例如細(xì)胞裂解物）中分離特定的目標(biāo)蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物。免疫沉淀的蛋白質(zhì)可以通過電泳、蛋白質(zhì)染色和質(zhì)譜進(jìn)一步分析。 MagVigen™ 納米顆粒比傳統(tǒng)微珠小得多。這一特征使得納米顆粒能夠更好地接觸抗原表位，并且減少對蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物的天然功能的干擾。此外，MagVigen™ 納米顆粒的表面經(jīng)過涂層，可減少與細(xì)胞蛋白質(zhì)和其他生物分子的非特異性相互作用。此功能允許更具體地“下拉"真正的蛋白質(zhì)復(fù)合物靶標(biāo)。
為了獲得納米顆粒的最佳結(jié)果，建議在添加到樣品中之前清洗納米顆粒。
渦旋 MagVigen™ 納米粒子 10-20 秒。
取 50μl 納米顆粒溶液，加入 100μl 1X Washing Buffer，渦旋混勻。
將磁鐵放在管的側(cè)面 2-5 分鐘，然后小心地除去上清液（磁鐵仍位于側(cè)面），將納米顆粒與溶液分離。
注意： 在微量離心管的側(cè)面應(yīng)該可以看到含有深棕色納米粒子的透明沉淀。
洗滌納米顆粒 2 次。
將 2 μg 生物素抗體（或按照公司方案推薦的量）添加到含有細(xì)胞裂解物的試管中。
在冰上孵育一小時。
將 50μl 預(yù)洗的 MagVigen™ 納米粒子添加到管中。在 4°C 下旋轉(zhuǎn) 2 小時。
用磁鐵將納米顆粒與樣品溶液（細(xì)胞裂解物）分離。除去上清液。
用所用的50μl裂解緩沖液清洗納米粒子3次。
最后一次洗滌后，除去上清液，并向珠子中添加 100μl 洗脫緩沖液。
渦旋并孵育 5 分鐘。
從溶液中磁性分離納米顆粒。收集上清液，同時避免干擾珠粒。目標(biāo)蛋白位于上清液中，可供分析。
使用前輕輕渦旋或移液管中的 MagVigen™-鏈霉親和素磁性納米顆粒。
等分 50 μl 納米顆粒溶液用于富集實(shí)驗(yàn)。
注： 50 μl 一般足以富集 1-10×10 5外泌體。外泌體捕獲效率可能受到樣品中外泌體頻率、外泌體表面表達(dá)的抗原/表位密度以及抗體親和力等因素的影響。相應(yīng)地調(diào)整納米顆粒的量。
用 500 μl 洗滌緩沖液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在管的側(cè)面 1-2 分鐘，然后小心地除去上清液（磁鐵仍在側(cè)面），將納米顆粒與溶液分離。
將 500 ng 生物素偶聯(lián)抗體（體積為 100-200 μl）添加到納米顆粒中，并在旋轉(zhuǎn)器上孵育 30-60 分鐘。
注意： 50 μl 納米顆?？梢越Y(jié)合約 200 ng 的抗體。
用 500 μl 洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結(jié)合的抗體。
將納米顆粒-抗體綴合物重懸于洗滌緩沖液 (50 μl) 中，并將其添加到細(xì)胞樣品中，使總體積為 0.1-0.5 ml。
將納米顆粒與預(yù)富集的外泌體樣品在軌道搖床上于 2°C™ 8°C 下孵育 2 小時或過夜。
孵育后，使用磁鐵將納米顆粒（帶有結(jié)合的外泌體）從溶液中分離出來，并小心地除去上清液。
用 500μl 洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-外泌體復(fù)合物。
外泌體結(jié)合的納米粒子現(xiàn)已準(zhǔn)備好進(jìn)行外泌體裂解、凝膠電泳和蛋白質(zhì)印跡分析。
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