C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cel

產(chǎn)品編碼：                      保存條件： -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞基因型：

F^–ompT hsdSB (rB^- mB^-) gal dcm (DE3)

 

C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞簡要說明：

 OverExpress C43(DE3) 、OverExpress C41(DE3) 兩個(gè)菌株均起源于 BL21(DE3) ，其優(yōu)點(diǎn)是可以高效表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白。
OverExpress C41(DE3) 跟BL21(DE3) 的區(qū)別在于其基因組含有至少一個(gè)未知突變，這個(gè)未知突變使其獲得了高效表達(dá)毒性蛋白（1-5）的能力，此突變位點(diǎn)參與大腸桿菌表達(dá)毒性蛋白時(shí)的細(xì)胞死亡途徑；OverExpress C43(DE3) 來源于OverExpress C41(DE3) ，是通過篩選OverExpress C41(DE3)對另一個(gè)不同毒性蛋白的抗性菌株獲得。
 OverExpress C43(DE3) 菌株具有比OverExpress C41(DE3)更強(qiáng)的表達(dá)毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以說OverExpress C43(DE3) 菌株與BL21(DE3)相比擁有至少兩個(gè)未知突變，正是這兩個(gè)未知突變使其獲得了更廣泛的表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。

此菌株含有DE3區(qū)，可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。 High5^TM系列OverExpress C43(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×10⁸ cfu/μg DNA。
 
 

C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞操作說明：

1.  取100 μl冰上融化的OverExpress C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，加入目的DNA并用指尖輕輕管底混勻(避免用槍吸打)，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)12小時(shí)。

 

C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.   感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
4.  誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。