BL21(DE3)感受態(tài)細胞基因型：

F^- ompT hsdSB(r_B^- m_B^- ) gal dcm(DE3)

BL21(DE3)感受態(tài)細胞簡要說明：

 BL21（DE3）感受態(tài)細胞用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。
λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于BL21的染色體上，所以稱為BL21(DE3)?？赏瑫r表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。
 BL21（DE3） 感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達10⁷cfu/μg。
 

BL21(DE3)感受態(tài)細胞操作說明：

1.  取100μl冰上融化的 BL21（DE3）感受態(tài)細胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激90秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

BL21(DE3)感受態(tài)細胞注意事項：

1.   感受態(tài)細胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
4.  誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

 

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