葡萄糖是大多數(shù)生物體中能量供應(yīng)的主要來(lái)源，目前的研究顯示，葡萄糖攝取異常跟多種疾病相關(guān)，例如在許多癌癥細(xì)胞中, 表現(xiàn)有葡萄糖攝取的上調(diào), 從而表現(xiàn)出很高的有氧糖酵解比率；胰島素耐受細(xì)胞在遇到胰島素刺激時(shí), 會(huì)出現(xiàn)葡萄糖攝入減弱。因此葡萄糖攝取的檢測(cè)成為許多細(xì)胞代謝相關(guān)疾病中的一個(gè)重要的指標(biāo)。

通過(guò)測(cè)量組織和細(xì)胞中葡萄糖類(lèi)似物2-脫氧葡萄糖（2-DG）的攝取已被廣泛認(rèn)為是一種測(cè)定葡萄糖攝取的可靠方法，可用來(lái)評(píng)估萄糖的攝取量以及研究葡萄糖代謝的調(diào)節(jié)和胰島素抵抗的機(jī)制。通常我們是通過(guò)使用同位素氚或C14標(biāo)記的非代謝型的2-DG來(lái)檢測(cè)2-DG的攝入量。然而，同位素標(biāo)記探針的使用較為昂貴的，并且檢測(cè)時(shí)需要繁瑣的特殊處理程序。

葡萄糖攝取分析解決方案如下：

AAT 的Screen Quest™比色法葡萄糖攝取分析試劑盒可采取非放射性分析分析的方法對(duì)組織或培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行葡萄糖攝取分析。

在檢測(cè)過(guò)程中，2-DG被葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白吸收，并代謝成2-DG-6-磷酸（2-DG6P），不能代謝的2-DG6P在細(xì)胞中積累，積累的量與細(xì)胞的葡萄糖攝取成正比，累積的2-DG6P被酶促氧化并產(chǎn)生NADPH，然后通過(guò)顯色NADPH探針特異性檢測(cè)NADPH，通過(guò)酶標(biāo)儀讀取570nm-610nm的OD值信號(hào)即可反應(yīng)2-DG的攝取情況。

檢測(cè)結(jié)果展示：

在分化的3T3-L1脂肪細(xì)胞和3T3-L1成纖維細(xì)胞中對(duì)2DG攝取進(jìn)行檢測(cè)。使用SpectraMax（Molecular Devices）微孔板讀板器，在黑孔/透明底細(xì)胞培養(yǎng)Poly-D賴(lài)氨酸板子中，使用Screen Quest™比色法葡萄糖攝取檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

A：陰性對(duì)照，無(wú)胰島素，無(wú)2-DG處理.

B：在無(wú)胰島素的情況下2DG攝取.

C：在1mM胰島素存在下2DG攝取.

D：在1mM胰島素和200 mM促視黃素存在下2DG攝取.

E：在1mM胰島素和5mM D-葡萄糖存在下2DG攝取.

比色法葡萄糖攝取試劑盒，還有2-NBDG葡萄糖攝取檢測(cè)試劑盒，2-NBDG是一種熒光標(biāo)記的葡萄糖示蹤劑，2-NBDG通過(guò)與葡萄糖相同的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUT）轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中。一旦2-NBDG被細(xì)胞攝取，它就在C-6位置發(fā)生磷酸化，得到2-NBDG-6-磷酸，它很好地保留在細(xì)胞內(nèi)。與其他葡萄糖示蹤劑（例如2-DG或FDG）相比，2-NBDG可實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞水平上具有高時(shí)間和空間分辨率的2-NBDG的原位測(cè)量。（適用于熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)）

細(xì)胞中2-NBDG攝取的測(cè)定原理: 一旦2-NBDG被細(xì)胞吸收，它會(huì)在C-6位置進(jìn)行磷酸化，生成2-NBDG-6-磷酸鹽，該磷酸鹽會(huì)很好地保留在細(xì)胞內(nèi), 熒光強(qiáng)度與細(xì)胞葡萄糖攝取活性成正比。

文章來(lái)源：武漢艾美捷科技有限公司

葡萄糖攝取分析丨艾美捷高性?xún)r(jià)比試劑盒

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