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消化法轉(zhuǎn)化細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作詳情
閱讀：139 發(fā)布時間：2017-8-14一. 轉(zhuǎn)化細(xì)胞傳代前準(zhǔn)備：
1.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。
3.正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染。
4.點燃酒精燈：注意火焰不能太小。
5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。
6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。
7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。
8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。
二.轉(zhuǎn)化細(xì)胞胰蛋白酶消化；
1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，*消化溫度是37℃。
2. 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時細(xì)胞消化適度。
3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。
95% Schaftoside *： 夏佛塔苷 規(guī)格:
98% curculigoside *： 仙茅苷 規(guī)格:
98% Adenosine *： 腺苷 規(guī)格:
95% alpha-Methyl-L(+)-tryptophan *： 相思豆堿 規(guī)格:
98% Vanillic acid *： 香草酸 規(guī)格:
≥98% coumarin *： 香豆素 規(guī)格:
≥98% Vanillin *： 香蘭素 規(guī)格:
≥98% Typhaneoside *： 香蒲新苷 規(guī)格:
轉(zhuǎn)化細(xì)胞