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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 9L/lacZ (大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0623 |
商品介紹：
名稱 9L/lacZ (大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞) 別稱9L/LacZ 種屬大鼠 年齡（性別）雄性 組織來(lái)源腦，膠質(zhì)細(xì)胞 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 背景描述The cells constitutively express the lacZ reporter gene product, E. coli derived beta-gal, as revealed on tissue sections by histochemical stain, and single tumor cells can be identified. Lymphocytes and other responding cells can be identified by double labeling with antibodies on the same slide. The contrast between stained cells and background facilitates image analysis. The beta-gal expression is very stable, but cells may need to be re-cloned after months of growth in culture. 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基DMEM＋10%FBS＋1%P/S 推薦傳代比例1:4-1:8 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, forms tumors in the brains of CD Fischer 344 rats 基因表達(dá)情況beta galactosidase (beta-gal) |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
AFP 基因全長(zhǎng)ORF克隆
XRCC6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
KRT6A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ADCK4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CHRNA3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TNFRSF21 基因全長(zhǎng)ORF克隆
OLFM2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CTBP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SH2D2A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
FAM151A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
9L/lacZ (大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞)胰胨大豆瓊脂斜面（TSA） 英文名稱：Tryptic Soy Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Beta-defensin 126
78-5000 pg/mL 人血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)ELISA試劑盒
志賀氏菌增菌肉湯-新生 英文名稱：Shigella Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.625-40 ng/mL 人上皮細(xì)胞粘附分子(EPCAM)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-1 receptor-associated kinase 3
0.625-40 ng/mL 人β位淀粉樣前體蛋白裂解1/β-分泌(BACE1/β-Secretase)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL 人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA試劑盒
沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（SDB) 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：500ml*20瓶
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Alpha-amylase 1
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