化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠口腔粘膜成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1347 |
商品介紹：
名稱 小鼠口腔粘膜成纖維細胞 2.組織來源：口腔黏膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠口腔粘膜成纖維細胞分離自口腔粘膜組織；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分。前借口裂與外界相通，后經(jīng)咽峽與咽相續(xù)?？谇粌?nèi)有牙、舌等器官。口腔的前壁為唇、側(cè)壁為頰、頂為腭、口腔底為黏膜和肌等結(jié)構(gòu)?？谇唤枭稀⑾卵拦譃榍巴鈧?cè)部的口腔前庭（oral vestibule）和后內(nèi)側(cè)部的固有口腔（oral cavity proper）；當(dāng)上、下頜牙咬合時，口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠口腔粘膜成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠口腔粘膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M230 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
LMAN2L 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
DPEP2 / MBD-2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TMEM27 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CRP / C-Reactive Protein 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
BMPR1B / ALK-6 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CD22 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 / 恒河猴 CTLA4 / CD152 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CD14 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 OLR1 / LOX1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠口腔粘膜成纖維細胞3,3-二甲基烯酸 98%芬苯達唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Phospho-FRA1 (Ser265) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化FRA-1蛋白抗體IgG
4-(二乙) 99%芬苯達唑 98%Anti-FSCN1/FITC 熒光素標(biāo)記纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體IgG
3-巴豆酸乙酯 99%托品酸 98%Anti-FSH/FITC 熒光素標(biāo)記促卵泡抗體IgG
3,3-二甲基烯酸甲酯 98%剛果紅 ARAnti-FSH-R/FITC 熒光素標(biāo)記促卵泡受體抗體IgG
克羅米通 97%剛果紅 ACSAnti-FSP/Spastin/FITC 熒光素標(biāo)記抗纖維母表面抗原抗體IgG
鹽酸坦索羅辛 98% 720 I.U./mgAnti-FST/FITC 熒光素標(biāo)記抗卵泡抑素抗體IgG
三丁基膦 95%泰洛星 效價potency: ≥800 units/mg tylosinAnti-F1 operon positive regulatory protein(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（N端）IgG
3-(異酰氧)基氧基硅烷 97%磺異噁唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-F1 operon positive regulatory protein(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（C端）IgG
化工儀器網(wǎng)