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HULEC-5a (肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞)

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更新時(shí)間:2025-02-27 07:28:42瀏覽次數(shù):311

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào) GOY-01X0553 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 產(chǎn)品僅供科研使用    
HULEC-5a (肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞) 的相關(guān)*:微型RNA(miRNA)同位素探針制備試劑盒 10次
特定微型RNA(miRNA)擴(kuò)增引物合成 2 U
特定成熟微型RNA(miRNA)分子合成 2 U
特定成熟微型RNA(miRNA)反義抑制劑合成 2 U
特定成熟微型RNA(miRNA)2位修飾抑制劑合成 2 U
微型RNA(miRNA)目標(biāo)基因探測(cè)試劑盒 5次

詳細(xì)介紹

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

QQ截圖20210907103850.png

產(chǎn)品屬性:   

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

HULEC-5a (肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞)

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

GOY-01X0553

商品介紹:

名稱(chēng)    HULEC-5a (肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞)    

別稱(chēng)HULEC-5a; HULEC-5A; Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a

年齡(性別)新生

組織來(lái)源肺

生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

生物安全等級(jí)2

生長(zhǎng)培養(yǎng)基MCDB13110ng/ml EGF1μg/ml Hydrocortisone10mM L-glutamine10% FBS1% P/S

推薦傳代比例1:2-1:4

推薦換液頻率2~3/

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO2,5%

溫度:37℃

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:

1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;

4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;

5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

 CAPNS2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 CLDN14 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 PCMT1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 IL23R 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 CACNA2D4 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 SUMO1P1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 GPR83 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 ADH1C 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 SYP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

 TMED2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

HULEC-5a (肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞) 250mL Karnovsky固定液 Karnovsky Fixative Solution 常溫保存

50mL Beta Glycerophosphate Solution(beta-甘油溶液),100mM Beta Glycerophosphate Solution,100mM 常溫保存

50mL DN2-Mercaptoethanol(2)  

2 ug pG5lac pG5lac 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

0.1%煌綠  1ml*20

1瓶 CCC-HSF-1細(xì)胞株 CCC-HSF-1 低溫運(yùn)輸和保存

細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基(不含瓊脂)  250g

 


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