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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 豬主動脈內皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0675 |
商品介紹：
名稱 豬主動脈內皮細胞 2.組織來源：主動脈組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 豬主動脈內皮細胞分離自主動脈組織；主動脈是體循環(huán)的動脈主干。其運行路徑為：升主動脈起于左心室，至右側第2胸肋關節(jié)高度移行為主動脈弓，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈；在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈，以上為胸主動脈，至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動脈；髂總動脈在骶髂關節(jié)高度分為髂內、外動脈。主動脈內皮細胞是覆蓋在主動脈內面的單層細胞，可分泌一系列血管活性物質而保持血管穩(wěn)態(tài)，當其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導致一些心血管疾病的發(fā)生。因此，主動脈內皮細胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機制及治療藥物*的工具。內皮細胞或血管內皮是一薄層的專門上皮細胞，由一層扁平細胞所組成。它形成血管的內壁，是血管管腔內血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內皮細胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至最小的微血管。 5.方法簡介： 普諾賽(Procell)實驗室分離的豬主動脈內皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 普諾賽(Procell)實驗室分離的豬主動脈內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-P001 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CAV1 基因全長ORF克隆
CTSO 基因全長ORF克隆
CCR6 基因全長ORF克隆
NEDD4 基因全長ORF克隆
SMURF2 基因全長ORF克隆
CBLB 基因全長ORF克隆
STIM1 基因全長ORF克隆
EIF2C3 基因全長ORF克隆
UBE2D1 基因全長ORF克隆
EIF2C4 基因全長ORF克隆
豬主動脈內皮細胞OADC添加劑 英文名稱： 產品規(guī)格：10ml*10支
干酪素 英文名稱： 產品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 人脂肪酸結合蛋白5(FABP5)ELISA試劑盒
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 英文名稱：Lactose Peptone Broth 產品規(guī)格：250g
15.6-1000 pg/mL 豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
0.312-20ng/mL 人重組醛糖還原(AKR1B1)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL 人硫代嗎啉羧化物脫氫(CRYM) ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL 人發(fā)動蛋白2(Dynamin-2)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL 人膜聯(lián)蛋白A6(ANXA6)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 3
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