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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化試劑盒>>糖代謝系列>> N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)微量法測試盒
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廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2022-03-15 10:21:59瀏覽次數(shù):150次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣 |
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貨號 | GOY-01S6768 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅用于科研 |
商品介紹:
NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶,廣泛存在于各種組織、體液和細(xì)胞中,以前列腺和腎近曲小管細(xì)胞內(nèi)含量最高。NAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
測定原理:
NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。
自備用品:
酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品名稱:N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/48樣
測試方法: 微量法
貨號:GOY-01S6768
分類:糖代謝系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。
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1號染色體開放閱讀框33抗體 神經(jīng)元電壓門控通道蛋白β2/Na+ CP type IIβ抗體
0酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體 神經(jīng)元電壓門控鈣通道γ3/L-type Ca++CP γ3抗體
0酸化整合素β2/Integrin β2抗體 神經(jīng)元蛋白22抗體
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