長尾綠猴腎細(xì)胞；4647說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 長尾綠猴腎細(xì)胞；4647說明書
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣為主
生長特性 貼壁生長
特征特性   
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

人前脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
TE-11(人食管細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
TBX培養(yǎng)基/TBX Agar/Tryptone Bile X-glucuronide Agar    檢測大腸菌群，大腸菌群培養(yǎng)24小時，顯蘭色    國產(chǎn)/進口    1升    
人肝動脈內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)/Columbia Blood Agar Base    各種細(xì)菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基    國產(chǎn)/進口    250克    
貂肺上細(xì)胞    英文名稱：        Mv 1 lu    
腦心浸液/無瓊脂腦心浸液/腦心浸液肉湯/BHI    用于金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)    國產(chǎn)/進口    250克    
大鼠肝動脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基/西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂/Simmons Citrate Agar    用于腸道菌的檸檬鹽利用試驗    國產(chǎn)/進口    250克    
Stripping Buffer/蛋白印跡膜再生液    500ml        100ml、500ml    
QG-56(人肺扁平上細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
PBS    規(guī)格：    gersion    500ml    
NCI-H460(人肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
mEPC, 小鼠內(nèi)祖細(xì)胞-骨髓        gersion        
MLTC-1(小鼠睪間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
HL-60, 人早幼粒白血病細(xì)胞                
Anglne(人卵巢細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2   5次    隨機引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒    
1個    帶柄尼龍篩    
20L    半干法電轉(zhuǎn)液 ( 干粉 )    
30μL    α-Tubulin 小鼠單抗    
核酸內(nèi)切酶 VIII    130642-1000    1000U
MnCl2溶液，25mM，PCR     130307-5    5mL
20 次    天凈沙 Ribo-SPIA cDNA 擴增試劑盒    
1500U    EcoRV    
200mL    體內(nèi)毒素清除劑    
1mL    胚胎裂解液    
ELISA 試劑盒    33    48/96T
動物種屬鑒定 PCR Mix 4    131128D-100    100 次
25μg    Xa 因子蛋白酶    
10mL    鈣蛋白酶抑制劑Ⅱ溶液，10mg/mL    
10g    2-(N- 啡啉 ) 乙磺酸    
10 次    Southern 血液 DNAout    
氯化膽堿    CAS67-48-1    100g
AG1 種    12-284    1mL
100 次    溴化乙錠清除劑    
25mg    核糖核酸酶 A，牛胰    
100mg    透明質(zhì)酸酶    
1套    GST 固定試劑盒    
姬姆色素染料    CAS51811-82-6    1g
LB 平板培養(yǎng)基 無抗    130848A-10    10 塊
30 次    一站式長效期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)