EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0910圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0910圖片
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系來(lái)源于一少精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法  1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Y1(Y-1) (小鼠腎上腺質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HL-60(人早幼粒急性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
胰腺腺英文名稱：Panc10.05
麥康凱瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/麥康克瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/MacC革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng)(抑制變形桿菌蔓延)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
KATO III(人胃細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人前列腺平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
H4-IIE(大鼠肝細(xì)胞 )5×106cells/瓶×2
小鼠脂肪細(xì)胞英文名稱：3T3 L1
BSC-1(猴腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
Annexin V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒規(guī)格：100次
人心房肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL17-trifluoromethylphenyl trinor Prostaglandin F2α （10 mg）9α，11α，15S-trihydroxy-17-trifluoromethylphenyl-18，19，20-trinor-prosta-5Z，13E-dien-1-oic acid； 17-trifluoromethylphenyl trinor PGF2α； 17-trifluoromethylphenyl trinor Prostaglandin F2α
Beraprost （sodium salt） （50 mg）2，3，3a，8b-tetrahydro-2-hydroxy-1-（3-hydroxy-4-methyl-1-octen-6-ynyl）-1H-cyclopenta[b]benzofuran-5-butanoic acid， monosodium salt； ML 1129|Procyclin|TRK 10Beraprost （sodium salt）
Leukotriene B3 （50 ug）5S，12R-dihydroxy-6Z，8E，10E-eicosatrienoic acid； LTB3； Leukotriene B3
tetranor-PGEM-d6 （100 ug）9，15-dioxo-11α-hydroxy-13，14-dihydro-2，3，4，5-tetranor-prostan-17，17，18，18，19，19-d6-1，20-dioic acid； tetranor-Prostaglandin E Metabolite-d6； tetranor-PGEM-d6
5-OxoETE-d7 （100 ug）5-oxo-6E，8Z，11Z，14Z-eicosatetraenoic-6，8，9，11，12，14，15-d7 acid； 5-KETE-d7； 5-OxoETE-d7
6-trans-12-epi Leukotriene B4 （50 ug）5S，12S-dihydroxy-6E，8E，10E，14Z-eicosatetraenoic acid； 5（S），12（S）-DiHETE|6-trans-12-epi LTB4； 6-trans-12-epi Leukotriene B4
Nitrotyrosine Affinity Sorbent （200 ug）Nitrotyrosine Affinity Sorbent
EIA Tracer Dye （1 ea）EIA Tracer Dye
Corticosterone AChE Tracer （500 dtn）Corticosterone AChE Tracer
Latanoprost AChE Tracer （500 dtn）Latanoprost AChE Tracer
HYLB肉湯/HYLB BrothBR100克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人膀胱成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
苞肉牛肉粒/Dried Meat Particle加入苞肉基礎(chǔ)中配成苞肉培養(yǎng)基100克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人大隱靜脈內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL