雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株；DMF7圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株；DMF7圖片
形態(tài)特性  圓形
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞株由陳松森教授實(shí)驗(yàn)室建立；雙位點(diǎn)Cys151和Cys183突變的c-Kit基因轉(zhuǎn)染293ET細(xì)胞，篩選獲得。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS；IL-3 or rhGM-CSF
傳代方法  1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  
同工酶 
染色體  
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Rosetta(DE3) 菌種    1mL
Rosetta(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞    0.1mL×10
Rosetta(DE3)plysS 菌種    1mL
RosettaBlue(DE3) 菌種    1mL
Rosetta-gami B(DE3) 菌種    1mL
Rosetta-gami B(DE3)plysS 菌種    1mL
Rosetta-gami(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞    0.1mL×10
Rosetta-gami(DE3) 菌種    1mL
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞    0.1mL×10
Rosetta-gami(DE3)plysS 菌種    1mL
ROX 參考染料    200μLC-8 Ceramine (50 mg)C-8 Ceramine, N-octylsphingosine
MAM2201 (5 mg)AM221 4-methylnaphthyl analog|JWH 122 N-(5-fluoropentyl) analog, MAM2201, [1-(5-fluoropentyl)-1H-indol-3-yl](4-methyl-1-naphthalenyl)-methanone
海藻酸（25GM）Alginic Acid， CAS 9005-38-3
三水FeNaEDTA（500GM）FeNaEDTA， 3H2O， CAS# 15708-41-5； MW 421.2
一水氯化錳（100GM）Manganese Sulfate， H2O， CAS# 10034-96-5； ≥98%
氫氧（1KG）Sodium Hydroxide， CAS# 1310-73-2； MW 41
L-纈氨酸（25GM）L-Valine， CAS# 72-18-4； MW 117.15； USP
AFC[7-氨基-4-三氟甲基香豆素] 可標(biāo)記多肽AFC [7-Amino-4-trifluoromethylcoumarin] Validated for labeling peptides
6-TAMRA， SE [6-羧基四甲基羅丹明，琥珀酰亞胺酯] 可標(biāo)記寡核苷酸6-TAMRA， SE [6-Carboxytetramethylrhodamine， succinimidyl ester] Validated for labeling oligos
TQ3 氨基磷酸酯Tide Quencher 3 phosphoramidite [TQ3 phosphoramidite]
5-TAMRA標(biāo)記的Asp天冬氨酸FMOC-Asp（5-TAMRA）-OH
20S蛋白酶體熒光底物（Suc-LLVY）2R110（Suc-LLVY）2R110
Pluronic F-127 10%溶液于水中Pluronic F-127 10% solution in water
pH熒光探針BCBCF， AM 超級(jí)純BCBCF， AM UltraPure grade
5（6）-FAM氨基磷酸酯5（6）-FAM Phosphoramidite
ROX 參考染料 II    100μL
RsaI    200U
熱敏磷酸酶    500U
熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶    100U
熱啟動(dòng) Tth DNA 聚合酶    250U
人 NK 細(xì)胞分離液 1.062    200mL
人白細(xì)胞分離液 1.078    200mL
人玻連蛋白    100μg