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制備液相色譜中的流動相設(shè)計與調(diào)整

時間:2024-6-6 閱讀:412
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   制備液相色譜中的流動相設(shè)計與調(diào)整是確保實驗成功和獲得準確數(shù)據(jù)的關(guān)鍵步驟。以下是對流動相設(shè)計與調(diào)整的詳細解釋,包括分點表示和歸納,以及參考文章中的相關(guān)數(shù)字和信息:
  一、流動相配置注意事項
  混合方式:
  流動相的混合通常按照體積比(V/V)進行,因為溶液的體積隨溫度變化而變化,按重量比混合雖然重復(fù)性較好但操作繁瑣。
  例如,配置50%乙腈水溶液時,可以直接量取乙腈500ml和水500ml,然后充分混合。
  試劑要求:
  高效液相色譜儀對試劑的純度有嚴格要求,如甲醇、乙腈等必須為色譜級純。
  水應(yīng)為超純水或購買質(zhì)量有保證的純凈水。
 

制備液相色譜

 

  二、流動相設(shè)計與調(diào)整原則
  由強到弱:
  一般先用極性強的90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗,根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑的比例。
  三倍規(guī)則:
  每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍。這是一個省力且有效的調(diào)整方法。
  粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):
  當分離達到一定程度時,應(yīng)將有機溶劑10%的改變量調(diào)整為5%,并逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。
  三、流動相pH值的調(diào)整
  弱酸樣品:
  流動相的pH值越小,組分的k值越大。當pH值遠低于弱酸的pKa值時,弱酸主要以分子形式存在。
  分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量的弱酸,如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。
  弱堿樣品:
  對于弱堿樣品,情況相反。分析時通常在流動相中加入少量的弱堿,如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
  四、含緩沖鹽流動相的配制
  配置緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級純,稱樣要精準。
  配置好后必須通過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。
  注意:緩沖鹽要臨用新配。
  總結(jié)
  流動相的設(shè)計與調(diào)整是液相色譜實驗中至關(guān)重要的一環(huán)。通過合理的混合方式、試劑選擇、pH值調(diào)整以及含緩沖鹽流動相的精確配制,可以確保實驗的高效性和準確性。同時,根據(jù)實驗需要,靈活運用由強到弱、三倍規(guī)則和粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)等原則,可以進一步優(yōu)化實驗條件,提高分離效果。
 

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