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廣州同譜實驗儀器有限公司
主營產品： kromasil色譜柱,通用石墨管,SPE固相萃取小柱 |
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2017-11-27 閱讀(3615)
操作條件要求：
由于ACQUITY UPLC BEH HILIC色譜柱不含有任何鍵合相，因此其pH使用范圍為1-8，可以在90℃穩(wěn)定范圍內使用
同其它任何色譜柱一樣，在pH、壓力以及高溫條件下使用將縮短色譜柱壽命
色譜柱平衡：
用50倍柱體積的50/50乙腈/水平衡，如果流動相中含有緩沖鹽則要求流動相中緩沖鹽的zui終濃度是10 mmol/L（以水相部分的濃度計算）；
在開始進樣前，用20倍柱體積的起始流動相平衡后再進樣
如果使用梯度條件，在進樣前用8-10倍柱體積的流動相平衡
沒有充分平衡的色譜柱將可能會出現(xiàn)保留時間的波動
總是保持流動相中緩沖液的濃度為10mM（包括梯度條件下的應用）將得到更好的峰形
流動相要求：
總是經(jīng)常保持至少5％的極性溶劑在流動相體系中或梯度流動相中（如5％水，5％甲醇或2％水＋3％甲醇等），這將保證HILIC色譜填料始終處于水化潤濕狀態(tài)
在流動相體系中至少需要保證含有40％的有機溶劑（如乙腈）
盡量避免使用磷酸鹽體系的流動相（磷酸鹽緩沖液可能會在HILIC流動相體系中析出）
同甲酸或乙酸流動相相比，甲酸銨或乙酸銨緩沖溶液作流動相可以得到重現(xiàn)性更好的結果。如果方法中一定要用甲酸或乙酸，應該用0.2%（v/v）而不是0.1%（v/v）
進樣溶液的要求：
如果可能，進樣溶劑應該是100％有機溶劑，要盡可能去除樣品溶液中的水或將其含量zui低化。選擇洗脫強度弱的HILIC溶劑如乙腈、異丙醇、甲醇等
通用的進樣溶液是75/25乙腈/甲醇，使用此條件可以獲得較好的樣品溶解度和色譜峰形
避免使用水或DMSO作進樣溶劑（色譜峰形很差）
如果樣品內含有水或DMSO，需要使用反相SPE技術將溶劑體系轉換為乙腈。如果確實不能進行此操作，需要用有機溶劑稀釋水或DMSO。
其它需要注意的問題：
ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱僅僅是用來分析和保留強極性堿的，酸性、中性或非極性化合物沒有保留
對于分子量低于200道爾頓的強極性堿，ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱的*流速范圍是0.4~0.8ml/min
同Atlantis HILIC 硅膠基質的色譜柱相比，ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱的保留要弱（梯度條件下保留約低20％，等度條件下保留約低35～65％），這是由于BEH顆粒的表面硅羥基濃度較低的原因
在HILIC的使用中，請注意水是洗脫能力zui強的溶劑，因此樣品溶液中必須盡可能避免含水
摸索條件建議使用一個梯度條件（從95％乙腈至50％乙腈的梯度），如果沒有保留，則用95：3：2的乙腈：甲醇：水相緩沖液進行等度分析
將流動相中的水換成甲醇、丙酮或異丙醇也能提高保留
請確保進樣針清洗的弱清洗溶劑是起始流動相（如高比例有機溶劑），否則峰形將變差
