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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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更新時間：2023-08-29 09:27:27瀏覽次數(shù)：2599
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免疫熒光染色實驗
免疫熒光是標記免疫技術(shù)發(fā)展早的一種，它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎上建立起來的一項技術(shù)，通過將抗體與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
1、細胞固定和通透
為達到佳的檢測效果，細胞需要經(jīng)過固定和通透。這些步驟非常關鍵，細胞和抗原需要佳的結(jié)構(gòu)，并利于抗體與抗原結(jié)合。通常情況下，需要通過以下步驟得以實現(xiàn)：細胞用2%-4%多聚甲醛固定，之后用0.1%皂角苷或0.02%的Triton X-100進行通透。前者是比較溫柔的處理，但是對于核內(nèi)抗原可能無效，需要用到Triton。使用皂角苷進行通透時，要注意它會引起細胞膜的可逆性通透，也就是除了在通透初期，在每個抗體孵育環(huán)節(jié)都需要進行通透。另外，細胞可以用冰甲醇進行同時固定和通透，可以避免去垢劑的使用。
2、抗體特異性
免疫熒光需要用到特異性非常強的抗體，可以避免高背景和不理想的蛋白定位結(jié)果。在大多數(shù)情況下，純化抗體的效果很好，但是正確的對照可以幫助定位抗原。使用只有二抗染色的片子作為陰性對照，有利于減少降低背景干擾。
3、合適的抗體稀釋比例
通過優(yōu)化抗體稀釋比例來優(yōu)化染色，通常情況下1ug/ml的純化抗體或者1:100-1:1000的抗血清足夠達到特異性染色的結(jié)果。但在能低背景染色的前提下，可以通過增加濃度來提高信號強度。如果是*次使用該抗體或測定某抗原，強烈建議濃度梯度實驗。
4、優(yōu)化緩沖液和封閉劑
盡管很多抗原在常見的Buffer如PBS中可以很好的被染色，但是對于某些目的抗原，更換一下含有不同離子的緩沖液，比如鈣、鎂、鉀等，可以帶來很大程度上的改善。Rockland可提供優(yōu)化過的IHC用封閉緩沖液，同樣適用于熒光染色實驗。
5、選擇正確的二抗
如果您需要做免疫實驗，我們強烈建議您選擇進行過預吸附的二抗進行單染實驗；如果是雙重甚至是多重染色，那么使用預吸附的二抗。同時，請優(yōu)先選擇來自同一物種的二抗
免疫熒光染色實驗客戶提供
細胞株或細胞爬片。注：細胞爬片不宜太密；細胞固定。組織切片，一抗
公司提供
基本實驗步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝
實驗周期：1-3周
