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無需預孵育!導入細胞質(zhì)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑

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更新時間:2020-09-10 14:35:00瀏覽次數(shù):981

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 一個月以上 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
無需預孵育!導入細胞質(zhì)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑
ProteoCarry <Protein Transfection Reagent>
本產(chǎn)品是將蛋白以及葡聚糖等生物大分子導入細胞內(nèi),尤其是導入細胞質(zhì)的試劑。傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑存在蛋白滯留在內(nèi)體或溶酶體中的問題,但是由于本產(chǎn)品可以高效地將蛋白運送至細胞質(zhì),可以廣泛地適用于在評價導入蛋白的細胞內(nèi)功能和抗體導入引起的功能抑制誘導等的實驗。

詳細介紹

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無需預孵育!導入細胞質(zhì)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑             

ProteoCarry <Protein Transfection Reagent>

 

 

本產(chǎn)品是將蛋白以及葡聚糖等生物大分子導入細胞內(nèi),尤其是導入細胞質(zhì)的試劑。傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑存在蛋白滯留在內(nèi)體或溶酶體中的問題,但是由于本產(chǎn)品可以高效地將蛋白運送至細胞質(zhì),可以廣泛地適用于在評價導入蛋白的細胞內(nèi)功能和抗體導入引起的功能抑制誘導等的實驗。另外與傳統(tǒng)產(chǎn)品不同的是,本品無需與蛋白進行預孵育,所以不會形成復合體,低限度地限制其對蛋白功能的影響。

※本產(chǎn)品僅供研究,研究以外請勿使用。

 

 

◆蛋白轉(zhuǎn)染試劑及其問題

 

蛋白轉(zhuǎn)染試劑(Proteofection試劑)是將重組蛋白和抗體直接導入細胞的工具。與將質(zhì)粒導入以誘導表達目的蛋白的方法相比,可以更迅速地導入目的蛋白,因而受到了廣泛地關(guān)注。

雖然已經(jīng)開發(fā)了許多基于肽、陽離子的脂質(zhì)或聚合物的蛋白轉(zhuǎn)染試劑,但它們都是與蛋白形成復合物后,通過胞吞作用攝入細胞內(nèi),破壞內(nèi)體膜將其運送至細胞質(zhì)。然而,現(xiàn)有的大部分試劑內(nèi)體膜的破壞活性低,并且從內(nèi)體逃脫不足,導入的蛋白大部分都轉(zhuǎn)移至溶酶體降解系統(tǒng)。本產(chǎn)品是一種新型肽蛋白轉(zhuǎn)染試劑,克服了傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑的缺點,通過強有力的內(nèi)體膜選擇性破壞活性,高效地向細胞質(zhì)運送蛋白,使轉(zhuǎn)導的蛋白在細胞內(nèi)發(fā)揮活性。另外,與傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑不同,本品無需與蛋白的復合物,不僅僅是蛋白,還可以向細胞質(zhì)導入生物大分子(葡聚糖等)。

 

 

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圖1. 細胞導入原理的比較

 

 

圖2是導入熒光標記IgG的案例。不添加轉(zhuǎn)染試劑時,以內(nèi)體/溶酶體的染色為主,從細胞質(zhì)中無法獲得熒光信號,與之相對的,可以觀察到在本產(chǎn)品案例中,內(nèi)體、細胞質(zhì)被大面積染色。(詳情請參照應(yīng)用實例)

 

2.jpg

 

圖2. 向HeLa細胞導入熒光標記IgG的比較

 

 

◆特點

 

● 基于肽特性的蛋白轉(zhuǎn)染試劑,顯示出高度水溶性。

● 優(yōu)異的內(nèi)體膜破壞活性,與傳統(tǒng)方法相比顯示出高細胞質(zhì)傳達性。

● 無需與導入物質(zhì)進行預孵育,可以簡便且迅速地轉(zhuǎn)染。

● 由于不會與蛋白形成復合物,所以需要添加濃度較高的蛋白,但是可以低限度地抑制對蛋白功能的影響。

● 只需要1小時的處理就可以充分地轉(zhuǎn)染至細胞質(zhì)。

● 有無血清(<10% FBS)不會影響導入效率,可以根據(jù)想要使用的細胞設(shè)計實驗。

● 已有向細胞質(zhì)導入各種蛋白及生物大分子的應(yīng)用實例。

● 例:IgG抗體、功能性蛋白(Cre recombinase, Saponin)、多糖(葡聚糖)

● 推薦使用濃度幾乎沒有細胞毒性。

 

 

◆使用方法概述

 

3.jpg

 

 

1. 向新鮮的培養(yǎng)基(無血清培養(yǎng)基,10%以下含F(xiàn)BS培養(yǎng)基或PBS)添加本產(chǎn)品以及想要導入的蛋白。

1. (配制轉(zhuǎn)染混合液)。

1. ※無需預孵育

2. 用PBS清洗2次細胞(80%以下的融合狀態(tài))后,向細胞添加轉(zhuǎn)染混合液。

3. 在轉(zhuǎn)染混合液中培養(yǎng)細胞(~1h)

4. 用PBS清洗2次細胞后,添加新鮮的培養(yǎng)基。

5. 實現(xiàn)各項應(yīng)用。

 

 

◆試劑盒組成

 

● ProteoCarry(4 mg)

● FITC-dextran(2 mg,陽性對照用)

 

 

實驗次數(shù)的預測

 

孔板的尺寸

ProteoCarry

FITC-dextran

6 well

14 assays

5 assays

12 well

28 assays

10 assays

24 well

56 assays

20 assays

48 well

140 assays

50 assays

96 well

280 assays

100 assays

 

 

◆有導入數(shù)據(jù)的細胞

 

HeLa, SW280, COS7, NIH3T3, HUVEC

 

 

參考導入量

 

導入物

推薦培養(yǎng)基的終濃度

抗體

50~250 μg/mL

蛋白

Saponin

1~10 μg/mL

Cre recombinase

10~100 μg/mL

FITC-dextran
    (陽性對照)

200 μg/mL

 

※導入效率根據(jù)細胞類型,細胞數(shù)量和蛋白類型各種因素改變。以上數(shù)據(jù)僅供參考,建議每次實驗都要優(yōu)化數(shù)據(jù)。

 

 

◆應(yīng)用實例

 

1. 向細胞內(nèi)導入FITC-dextran

 

向HeLa細胞導入FITC-Dextran(培養(yǎng)基的終濃度為200 μg/mL),僅向細胞添加FITC-Dextran時,(Reagent(-))觀察到點狀的熒光信號,細胞質(zhì)中幾乎沒有觀察到信號;相反,使用本產(chǎn)品時擴散到了整個細胞質(zhì)。

 

圖片.png

 

 

實驗概要:

 

向HeLa細胞(80% confluent)添加200 μg/mL FITC-dextran, 1×ProteoCarry in α-MEM,并培養(yǎng)1個小時。用PBS清洗細胞后,進行核染色(Hoechst)。

 

 

2. 向細胞內(nèi)導入熒光標記IgG

 

向HeLa細胞導入熒光標記IgG抗體(培養(yǎng)基終濃度為250 μg/mL),僅有抗體添加至細胞時,可以觀察到胞吞作用自發(fā)性攝入點狀的熒光信號,表明抗體停留在內(nèi)體和溶酶體中。另一方面,使用本產(chǎn)品時,不僅能觀察到點狀的內(nèi)體結(jié)構(gòu),還可以觀察到它主要在細胞質(zhì)中廣泛擴散。

※用熒光信號觀察細胞擴散時,與內(nèi)體相比,由于細胞質(zhì)的體積較大,信號會被稀釋。細胞質(zhì)信號的檢測需要添加高濃度的熒光標記蛋白,在本數(shù)據(jù)中添加了250 μg/mL的熒光標記IgG。

 

圖片.png

 

實驗概要:

 

向HeLa細胞(80% confluent)添加250 μg/mL熒光標記IgG,1×ProteoCarry in α-MEM并培養(yǎng)1小時。用PBS清洗細胞后,進行核染色(Hoechst)。

 

 

3. 向細胞內(nèi)導入Cre recombinase

 

將設(shè)計為Cre recombinase不存在時表達DsRed,只有在Cre recombinase存在時發(fā)生重組表達GFP的質(zhì)粒向HeLa細胞導入基因。相對于導入第二天就表達DsRed的HeLa細胞,使用本產(chǎn)品導入Cre recombinase(培養(yǎng)基終濃度為10 μM),依賴導入細胞內(nèi)的Cre recombinase表達GFP,本產(chǎn)品在維持Cre recombinase的功能下將其導入了細胞。

 

圖片.png

 

實驗概要:

 

向HeLa細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的第二天,向HeLa細胞添加10 μM Cre recombinase, 1×ProteoCarry in α-MEM,并培養(yǎng)1小時。用PBS清洗細胞后,用新的培養(yǎng)基再培養(yǎng)24小時。


 

◆保存

 

● 運輸:室溫

● 保存:-20℃

 

 

◆產(chǎn)品列表

 

 產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱包裝
FDV-0015

ProteoCarry<Protein Transfection Reagent>

ProteoCarry <蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑>

1 set

 

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