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HBsAgGi抗體/HBsAgGi ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2022-07-26 09:35:10瀏覽次數(shù):554

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 一個(gè)月以上 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
本產(chǎn)品是針對(duì)M-HBs的O型糖鏈修飾的PreS2的單克隆抗體,可特異性識(shí)別含有DNA的傳染性病毒顆粒。

詳細(xì)介紹

乙型肝炎病毒特異性檢測(cè)2716562934102334.png

HBsAgGi抗體 & HBsAgGi ELISA試劑盒



◆HBsAgGi HBs抗原的糖鏈異構(gòu)體


1.jpg


本產(chǎn)品是針對(duì)M-HBs的O型糖鏈修飾的PreS2的單克隆抗體,可特異性識(shí)別含有DNA的傳染性病毒顆粒。


關(guān)于乙肝肝炎病毒及HBsAgGi


乙型肝炎病毒(HBV)作為一個(gè)全球性的健康問(wèn)題,是傳染性zui強(qiáng)的病毒之一。

HBV包膜蛋白由三種表面抗原S-、M-和L-HBs組成,它們由含有PreS1、PreS2和S-結(jié)構(gòu)域的HBsAg基因產(chǎn)生1。 HBsAg被 N-聚糖和 O-聚糖高度糖基化2,3。全聚糖結(jié)構(gòu)分析顯示,PreS2結(jié)構(gòu)域中,只有在M-HBs上含有基因型C (gC) 中所包含的高度保守的O-糖基化位點(diǎn),而L-HBs上卻沒(méi)有4,5

HBsAgGi,是能與HBsAg的糖鏈異構(gòu)體相結(jié)合的重組單抗,其使用含有O型糖鏈的PreS2糖肽制備所得。與傳統(tǒng)的識(shí)別全部病毒顆粒的HBsAg檢測(cè)相比,HBsAgGi抗體可以特異性識(shí)別傳染性HBV顆粒(DNA病毒粒子)。


產(chǎn)品信息


HBsAgGi Recombinant mouse IgG1, 50μg

 產(chǎn)品編號(hào)                    

 635-54381                    

 對(duì)應(yīng)基因分型                    

 Genotype C                    

 同種型(isotype)                    

 小鼠IgG1                    

 輕鏈                    

 Kappa(κ)   型                    

 包裝                    

 50   μg                    

 用途


                   


 1.WB

2.HBV顆粒的免疫沉淀/分離

3.ELISA

4.HBV感染抑制測(cè)定

5.免疫組化

                   


 保存方法                    

 短期請(qǐng)保存于4℃,長(zhǎng)期請(qǐng)保存于-20℃,避免凍融。                    



HBsAgGi可特異性識(shí)別HBV顆粒中的M-HBsAg


HBV由衣殼蛋白質(zhì)(HBsAg),HBV核心,HBV DNA組成。HBsAg的基因由PreS1(藍(lán)),PreS2(紅),S(黑)三個(gè)領(lǐng)域組成。S-HBsAgs約一半都被N型糖鏈所修飾,其余不含糖鏈。而M-HBsAg的PreS2結(jié)構(gòu)域被O型糖鏈高度修飾,但L-HBsAg在同一位點(diǎn)卻幾乎不會(huì)被修飾。S-HBsAg存在數(shù)量最多,非傳染性顆粒大部分由S-HBsAg所構(gòu)成。而傳染性HBV顆粒內(nèi)核含有HBV DNA,被由所有類(lèi)型的HBsAg所形成的衣殼所包裹。HBsAgGi可特異性的識(shí)別在乙肝分型c型M-HbsAg中所*的O型糖鏈修飾PreS2領(lǐng)域。


2.jpg




HBsAgGi與基于S抗體的HBV顆粒識(shí)別


HBV患者的血清中含有的HBV DNA的傳染性顆粒比非傳染性顆粒要多得多??筍抗體會(huì)對(duì)包括非傳染性顆粒在內(nèi)的所有HBV顆粒進(jìn)行識(shí)別,而相比之下,HBsAgGi由于是識(shí)別含有M-HBsAg的傳染性HBV顆粒,因此HBsAgGi檢測(cè)不同于S抗體檢測(cè),可更準(zhǔn)確地識(shí)別HBV患者。


3.jpg


在HBV感染患者的血清中,大部分(超過(guò)99.9%)的HBV顆粒是亞病毒顆粒(SVP),主要是S-HBs。相比之下,感染性顆粒(DNA 病毒粒子)在整個(gè) HBV顆粒中含量比例不到0.1%。HBsAgGi可以從眾多HBV顆粒中,高效區(qū)分含DNA顆粒的糖肽結(jié)構(gòu)(粉色標(biāo)記)。



HBsAgGi 和其他檢測(cè)HBV的標(biāo)志物對(duì)比


下表對(duì)HBV標(biāo)志物進(jìn)行了對(duì)比。qHBsAg和HBV-DNA是傳統(tǒng)標(biāo)志物,而HBcrAg和 HBV-RNA是新型標(biāo)志物。列于表中的是目標(biāo)HBV顆?;蚍肿印)柎順?biāo)志物可檢測(cè)的顆?;蚍肿?,×代表無(wú)法識(shí)別此標(biāo)志物,或不推薦使用。

HBsAgGi 可檢測(cè)含有 M-HBsAg 的顆粒,例如 DNA 或 RNA 病毒粒子。


4.jpg



應(yīng)用實(shí)例


使用 HBsAgGi(左)和 PreS2(右)抗體進(jìn)行Western Blot


5.png                    



 ?左: HBsAgGi-gC (RCA-001),右: anti-PreS2 antibody                    

 ?Lane1: S-HBs (CHO) 50 ng                    

 ?Lane2: M-HBs (HEK293) 50 ng                    

 ?Lane3: L-HBs (yeast) 50 ng                    

 ?Lane4: serum (HBV patient) 1 μg                    

 ?二抗: HRP-labeled anti-mouse IgG                    


HBsAgGi-gC(左)可以檢測(cè)出M-HBs但不能檢測(cè)L-HBs。而市售的PreS2抗體(右)對(duì)L-HBs的識(shí)別能力很強(qiáng),對(duì)M-HBs的識(shí)別能力很弱。在HBV患者的人血清中,HBsAgGi-gC特異性識(shí)別M-HBs,而PreS2抗體識(shí)別M-HBs和L-HBs。



使用HBsAgGi-gC 包被的ELISA板 (RCEK-001) 和重組M-HBsAg 作為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行ELISA法檢測(cè)


6.jpg                    



 ?標(biāo)準(zhǔn)品: M-HBs (3.7 900 ng/mL)                    

 ?檢測(cè)樣品: HBV患者血清 (2 µL)                    

 ?血清 #1: HBsAg 6610 IU/mL, HBV DNA 3.1                    

 ?血清 #2: HBsAg 8612 IU/mL, HBV DNA 0                    

 ?血清 #3: HBsAg 36600 IU/mL, HBV DNA 8.3                    

 ?檢測(cè):生物素化 HBsAgGi-gC 抗體和 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素                    


ELISA板用HBsAgGi-gC包被,用HEK293細(xì)胞中表達(dá)的M-HBs制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。HBV患者的血清(#1-3)經(jīng)稀釋?zhuān)?00 µL中含有2 µL血清)并在同一ELISA板上進(jìn)行測(cè)量。HBsAgGi-gC也可以檢測(cè)NUC處理后的血清樣本(HBV DNA=0)。



使用 HBsAgGi-gC 進(jìn)行免疫沉淀


7.png                    



 ?原始樣品: HBV 患者血清 (4.1 logIU/20 μL)                    

 ?免疫沉淀?xiàng)l件:生物素化 HBsAgGi-gC (RCA-001) 2 μg,                    

?鏈霉親和素偶聯(lián)磁珠10 μL/1 mL TBS-T, 4°C, 16 hours                    

 ?HBV DNA 的定量:通過(guò)實(shí)時(shí) PCR 檢測(cè)20 μL 沉淀部分                    

?(免疫沉淀) 和上清部分 (Sup) 中的 HBV DNA。                    


將HBV顆粒稀釋至1 mL (4.1 logIU/20 μL) 并通過(guò)HBsAgGi-gC沉淀。在這種情況下,HBsAgGi-gC可以收集含有HBV DNA的HBV顆粒。



HBsAg糖鏈異構(gòu)體檢測(cè)用HBsAgGi ELISA試劑盒


8.jpg


本ELISA試劑盒含有可檢測(cè)M-HBs的O型糖鏈糖基化修飾PreS2的單抗,可檢測(cè)含有DNA的病毒顆粒。



試劑盒規(guī)格


 產(chǎn)品編號(hào)                    

 638-54371                    

 對(duì)應(yīng)基因分型                    

 Genotype C                    

 包裝                    

 96 Test                    


組成


 HBsAgGi 包被96孔板:96 孔 (8孔板×12)                    

 M-HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品 (1 mL)                    

 HRP標(biāo)記HBsAgGi (10 mL)                    

 稀釋液 (24 mL)                    

 TMB底物 (11 mL)                    

 20X 洗滌液 (50 mL)                    

 終止液   (12 mL)                    



ELISA使用方法

9.jpg

步驟1:HBV DNA顆粒首先被HBsAgGi抗體捕獲。

步驟2:洗滌后,ELISA微孔上捕獲的HBV顆粒將與HRP標(biāo)記的HBsAgGi抗體進(jìn)一步反應(yīng)。

步驟3:進(jìn)一步洗滌后,將HRP底物(TMB底物)加入孔中。孵育后,停止反應(yīng)并測(cè)量450nm處的吸光度數(shù)值。



標(biāo)準(zhǔn)曲線


將試劑盒中所包含的標(biāo)準(zhǔn)品 M-HbsAg(800ng/mL)梯度稀釋?zhuān){(diào)整為標(biāo)準(zhǔn)M-HBsAg(6.25~400ng/mL)溶液,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。


10.jpg                    


                   

使用HBsAgGi ELISA試劑盒進(jìn)行血清中HBsAgGi檢測(cè)                    

                   

檢測(cè)樣本:HBV患者3名的血清(1 µL),每個(gè)樣本分別進(jìn)行6次實(shí)驗(yàn)                    

標(biāo)準(zhǔn)M-HBsAgs (6.25 - 400 ng/mL)                    


樣品                    

qHBsAg (IU/mL)                    

HBsAgGi (µg/mL)                    

CV (%)                    

血清 #1                    

2100                    

4.5                    

2.52                    

血清 #2                    

8200                    

8.92                    

2.65                    

血清 #3                    

2200                    

11.04                    

1.82                    



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