BL21(AI) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格 ）

BL21(AI)：                                                   100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個月） 

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

BL21(AI) Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

BL21(AI)是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)。BL21(AI) 來源于BL21菌株，為Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，這兩種酶的缺失有效防止異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解。在培養(yǎng)基中添加L-阿拉伯糖可誘導(dǎo)araBAD啟動子下游T7RNA聚合酶的表達進而促進目的蛋白的表達。在培養(yǎng)基中添加葡萄糖可抑制araBAD啟動子下游T7RNA聚合酶的表達進而抑制目的蛋白的表達。BL21(AI) 感受態(tài)細胞適用于任何以T7啟動子為基礎(chǔ)的表達載體，能夠進行高水平的重組蛋白表達。因為菌株能夠?qū)w內(nèi)的T7 RNA聚合酶水平進行高效調(diào)節(jié)，BL21(AI) 感受態(tài)細胞能夠表達對其他BL21細胞有毒性或抑制生長的蛋白。普通重組蛋白在BL21(AI) 菌株中獲得產(chǎn)量和其他BL21菌株產(chǎn)量相當；對大部分毒性蛋白，在BL21(AI) 菌株中獲得的產(chǎn)量高于BL21(DE3)pLysS菌株或BL21(DE3)菌株。BL21(AI) 感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1.  BL21(AI)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意：

1. Brian Caliendo (Voigt 實驗室)報道過pCP20質(zhì)粒比較難于轉(zhuǎn)化到這個感受態(tài)細胞中，而pCP20轉(zhuǎn)化到其他菌株中都很正常，但是菌體原因未知。

2. 不加葡萄糖，BL21(AI) 細胞的araBAD啟動子下游的本底蛋白表達水平仍然很低，加入葡萄糖后能夠進一步的降低本底蛋白的表達水平。