JM108 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

JM108：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F- endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+) 

JM108 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

JM108來源于JM106菌株，初是作為黏粒文庫的宿主被改造而成。 JM108菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質粒DNA的產(chǎn)量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。JM108菌株大的特點是擴繁質粒產(chǎn)量大，純度高，且質量穩(wěn)定，特別是超螺旋質粒比例較高，超螺旋質粒所占比例一般>90%(gyrA96突變型說明JM108菌株的DNA-gyrase 基因被突變，導致拓撲異構酶Ⅱ的功能受影響，增加了超螺旋質粒的比例)，非常適合后續(xù)的動物細胞轉染實驗（超螺旋質?？商岣呒毎D染的效率）。此外該菌株具有萘啶酸抗性。開發(fā)的JM108感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. JM108感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱至少13小時。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。