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細(xì)胞分裂素對離體子葉的保綠效應(yīng)實(shí)驗(yàn)

閱讀:1718      發(fā)布時(shí)間:2018-12-3
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一、 目的

        使用恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、了解細(xì)胞分裂素對離體子葉的保綠作用及基本原理和方法。

二、原理  細(xì)胞分裂素可阻礙核酸水解酶和蛋白水解酶的產(chǎn)生,因此能延緩器官衰老,使離體葉片保綠,保綠作用的強(qiáng)弱可通過測定葉綠素含量的變化來衡量,也可由葉色變黃枯死的時(shí)間來衡量。 

三、材料、儀器設(shè)備及試劑 

1. 材料:黃瓜子葉;蘿卜子葉。 

2.  儀器設(shè)備:電子分析天平;分光光度計(jì);恒溫培養(yǎng)箱;恒溫水浴鍋;25ml容量瓶;25ml刻度試管;試管架;移液管;黃瓜子葉的培養(yǎng)皿(直徑5cm);瓷盤;刀片;尖頭鑷子;濾紙;吸耳球等。 

3. 試劑及配制:100μg·ml-16-BA溶液;95﹪乙醇 ;CaCO3粉末。  100μg·ml-16-BA母液配制:準(zhǔn)確稱取6-BA 10mg,  加幾滴1mol·L-1HC1溶解(可稍加熱溶解),然后慢慢加入蒸餾水稀釋后定容至100ml。 

四、實(shí)驗(yàn)步驟 

1. 黃瓜幼苗的培養(yǎng)  精選黃瓜種子,播入墊有濾紙的瓷盤中,加蒸餾水使之濕潤(注意種子不能漬水),待種子萌發(fā)后,在光下培養(yǎng)2~3d左右,直至子葉綠化。備用。 

2. 系列濃度6-BA溶液配制:吸取100μg·ml-16-BA母液,稀釋成10、5、0.5  μg·ml-1的系列濃度溶液。 

3. 離體黃瓜子葉的培養(yǎng) 

(1)取4套培養(yǎng)皿,編號,每套培養(yǎng)皿各墊一張濾紙,分別作0.5、5、10μg·ml-1的6-BA溶液和蒸餾水(CK)4個(gè)處理,即為組。 

(2)選取子葉大小、生長一致的黃瓜幼苗20株,每處理5  株(10片子葉),用刀片切下不附帶葉柄的子葉,分別稱取鮮重,將數(shù)據(jù)記入下表中。然后將子葉放入組相應(yīng)編號的培養(yǎng)皿中,分別加入不同濃度的6-BA溶液3ml,  對照(CK)加蒸餾水3ml。蓋上培養(yǎng)皿蓋,置于暗處,溫度25-28℃培養(yǎng)3 d 。  另取與組相同的黃瓜幼苗20株,用刀片切下不附帶葉柄的子葉作第二組,直接用來測定葉綠素含量。 

4. 第二組黃瓜子葉葉綠素含量的測定 

(1)葉綠素的提取  取3支25ml刻度試管,編號。稱取第二組的黃瓜子葉三份(3個(gè)重復(fù)),每份10片子葉,然后放入相應(yīng)編號的刻度試管中,各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3-4ml,用玻棒小心將子葉搗碎后,將試管放入45℃恒溫水浴提取葉綠素30min左右,直到子葉碎片無色為止,用濾紙過濾于25ml容量瓶中(如殘?jiān)詭ЬG色,可再加幾ml乙醇繼續(xù)提取,直至殘?jiān)鼰o綠色)。濾紙上的色素用乙醇慢慢點(diǎn)滴清洗入容量瓶中,后定容至刻度,搖勻,待測。 

(2)葉綠素含量的測定  在652nm波長處,以95﹪乙  醇為空白對照,測定葉綠素提取液的吸光度(A值)。并按公式計(jì)算出葉綠素含量。即為培養(yǎng)前子葉的原始葉綠素含量。 

5. 組黃瓜子葉葉綠素殘留量的測定  組黃瓜子葉在暗處培養(yǎng)3d后,按上述第(4)步驟方法分別測定各處理子葉葉綠素含量,并按公式計(jì)算出各處理葉綠素含量,即為暗培養(yǎng)后子葉葉綠素含量。 

五、結(jié)果計(jì)算  葉綠素含量計(jì)算公式:

D652 × 提取液總量(ml)  葉綠素含量(mg·g-1Fw)= ——————————————  34.5 × 樣品鮮重(g)  公式中:D652 — 在652nm波長下測定的吸光度值  34.5— 葉綠素a、b在652nm波長處的比吸收系數(shù)  培養(yǎng)后葉綠素含量  暗培養(yǎng)后葉綠素含量占培養(yǎng)前葉綠素含量(﹪)= —————————×100  培養(yǎng)前葉綠素含量

六、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、詳情可咨詢喆圖小編。

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