大鼠防御素D-5試劑盒

大鼠防御素D-5試劑盒通常指的是大鼠防御素 5（D-5）ELISA 試劑盒，以下是關(guān)于它的詳細(xì)介紹：

基本信息

• 用途：用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中防御素 5（D-5）的含量，僅限科研使用，不得用于臨床診斷15。

• 保存條件：一般需在 2-8℃避光保存，有效期通常為 6 個(gè)月5。

實(shí)驗(yàn)原理1

試劑盒組成1

• 48 孔配置：說明書 1 份、封板膜 2 片、密封袋 1 個(gè)、酶標(biāo)包被板 1×48、標(biāo)準(zhǔn)品（720ng/L）0.5ml×1 瓶、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶、酶標(biāo)試劑 3ml×1 瓶、樣品稀釋液 3ml×1 瓶、顯色劑 A 液 3ml×1 瓶、顯色劑 B 液 3ml×1 瓶、終止液 3ml×1 瓶、濃縮洗滌液（20ml×20 倍）×1 瓶。

• 96 孔配置：說明書 1 份、封板膜 2 片、密封袋 1 個(gè)、酶標(biāo)包被板 1×96、標(biāo)準(zhǔn)品（720ng/L）0.5ml×1 瓶、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶、酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶、樣品稀釋液 6ml×1 瓶、顯色劑 A 液 6ml×1 瓶、顯色劑 B 液 6ml×1 瓶、終止液 6ml×1 瓶、濃縮洗滌液（20ml×30 倍）×1 瓶。

樣本處理5

• 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn) / 分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

• 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn) / 分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

• 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn) / 分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn) / 分），仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（pH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右，通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn) / 分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

• 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量，加入一定量的 PBS（pH7.4），用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度，加入一定量的 PBS（pH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn) / 分），仔細(xì)收集上清，分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

操作步驟1

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九、第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第九、第十孔中各取 50μl 棄掉。

• 配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。

• 加樣：分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔。在空白孔中加樣品稀釋液 100μl，在待測(cè)樣品孔中先加待測(cè)樣品 10μl，再加樣品稀釋液 90μl，然后除空白孔外，各孔中加入酶標(biāo)試劑 100μl，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

• 洗滌：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

• 顯色：每孔加入顯色劑 A 液、B 液各 50μl，37℃避光孵育 15min。

• 終止：每孔加入終止液 50μl，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。

注意事項(xiàng)5

• 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

• 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

• 一次加樣時(shí)間好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

• 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。

• 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

• 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

• 底物請(qǐng)避光保存。

• 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。