關鍵詞:DNA合成服務|實驗技術服務
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DNA合成服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>DNA復制的一般過程：
脫氧核糖核酸(DNA)是生物界遺傳的主要物質(zhì)基礎。生物有機體的遺傳特征以密碼(code)的形式編碼在DNA分子上，表現(xiàn)為特定的核苷酸排列順序-即遺傳信息，在細胞分裂前通過DNA的復制(Replication)，將遺傳信息由親代傳遞給子代，在后代的個體發(fā)育過程中，遺傳信息自DNA轉(zhuǎn)錄(Transcription)給RNA，并指導蛋白質(zhì)合成，以執(zhí)行各種生命功能，使后代表現(xiàn)出與親代相似的遺傳性狀，這種遺傳信息的傳遞方向，是從DNA到RNA再到蛋白質(zhì)，即所謂的生物學“中心法則"，80年代以后在某些致癌RNA病毒中發(fā)現(xiàn)遺傳信息也可存在于RNA分子中，由RNA通過逆轉(zhuǎn)錄(reverse transcription)的方式將遺傳信息傳遞給DNA。
DNA復制起始的關健步驟是前導鏈DNA的合成，一旦前導鏈DNA的聚合作用開始，隨從鏈DNA的合成也隨著開始。由于前導鏈的合成是連續(xù)進行的，所以它的起始相對簡單，而隨從鏈的合成是不連續(xù)進行的，所以引發(fā)階段比較復雜。大腸桿菌的引發(fā)前體由Dna B. Dna C和單鏈結(jié)合蛋白組成。
(1)引物酶(primase)
它是一種特殊的RNA聚合酶，可催化短片段RNA的合成。這種短RNA片段一般十幾個至數(shù)十個核苷酸不等，它們在DNA復制起始處做為引物。RNA引物的3′桹H末端提供了由DNA聚合酶催化形成DNA分子*個磷酸二酯鍵的位置。
(2)引發(fā)體(primosome)
高度解鏈的模板DNA與多種蛋白質(zhì)因子形成的引發(fā)前體促進引物酶結(jié)合上來，共同形成引發(fā)體，引發(fā)體主要在DNA隨從鏈上開始，它連續(xù)地與引物酶結(jié)合并解離，從而在不同部位引導引物酶催化合成RNA引物，在引物RNA的3′桹H末端接下去合成DNA段，這就是隨從鏈不連續(xù)合成的開始。
1.DNA聚合酶Ⅰ：
DNA polⅠ是由一條多肽鏈組成，分子量為109KD。酶分子中含有一個Zn++，是聚合活性必須的。
大腸桿菌每個細胞中約有400個酶分子，每個酶分子每分鐘在37℃下能催化667個核苷酸參入到DNA鏈中，用枯草桿菌蛋白酶可將此酶水介成兩個片段，大片段分子量為76KD，通常稱為klenow片段，小片段為34KD。大小片段具有不同的酶活性。
(1)DNA聚合酶的5′→3′聚合活性：
這是DNA聚合酶zui主要的活性，按模板DNA上的核苷酸順序，將互補的dNTP逐個加到引物RNA3′桹H末端，并促進3′桹H與dNTP的5′桺O4形成磷酸二酯鍵，酶的專一性表現(xiàn)為新進入的dNTP必須與模板DNA堿基配對時才有催化作用，5′→3′聚合活性存在于klenow片段上。
DNA聚合酶催化的DNA鏈延長
(2)DNA聚合酶的3′→5′外切核酸酶活性：
這種酶活性的主要功能是從3′→5′方向識別并切除DNA生長鏈末端與模板DNA不配對而游離的核苷酸，這種功能稱為校對功能，這是保證其聚合作用的正確性*的，因此對于DNA復制中*的保真性是至關重要的。
(3)DNA聚合酶的5′→3′外切核酸酶活性：
這種酶活性是從DNA鏈的5′端向3′末端水解已配對的核苷酸，本質(zhì)是切斷磷酸二酯鍵，每次能切除10個核苷酸。因此，這種酶活性在DNA損傷的修復中可能起重要作用，對完成的DNA段去除5′端的RNA引物也是必須的。
DNA polⅠ的5′→3′聚合活性和5′→3′外切酶活性協(xié)同作用，可以使DNA一條鏈上的切口從5′→3′方向移動，這種反應叫做缺刻平移(nick translation)，利用此反應可在體外對DNA段進行放射性磷(α-32PdNTP)的標記制成探針(probe)，進行核酸的分子雜交實驗，是現(xiàn)代分子生物學的一項重要技術。