關(guān)鍵詞:抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>SSH是一項可以快速獲取兩個不同生物材料中差異表達(dá)基因的分子生物學(xué)技術(shù)，是快速篩選差異表達(dá)基因的有效方法，也是尋找新基因的重要手段。該技術(shù)尤其適合以genome尚不*清晰的物種或者以特殊材料為研究對象的科研工作者。
    基本流程:通過差減文庫構(gòu)建，文庫驗證和篩選（逆向斑點雜交），獲得陽性克隆，對陽性克隆測序及生物信息分析，可判定差異基因的情況。另外結(jié)合RACE技術(shù)可進(jìn)一步克隆所獲得的差異基因的cDNA全長序列，并可用Northern blot 或Real－Time PCR加以驗證。
客戶須知：
1. 客戶須在實驗開始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量，并提供相關(guān)信息。
2. 本公司在收到客戶提供的研究材料后會在第二個工作日起開始服務(wù)工作。
3. 工作完成后，本公司會將結(jié)果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料。
4. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟(jì)損失全部由客戶承擔(dān)。
提供材料具體要求：
客戶可以提供（組織、細(xì)胞或RNA ）。樣品需求量組織（2～ 4g），細(xì)胞（108），總RNA（純化后>200 μg），mRNA （純化后>2 μg ）。
實驗過程折疊編輯本段
抑制性消減雜交技術(shù)的基本實驗過程如下。
首先，將要進(jìn)行比較的兩種組織或細(xì)胞來源的mRNA 樣品反轉(zhuǎn)錄為cDNA，把含有目的基因的cDNA 稱為測試(tester)，把參考cDNA 稱為驅(qū)動(driver)，用同一種限制性內(nèi)切酶Rsa I 切割，產(chǎn)生末端平頭的片段，將測試cDNA 分為兩份，每份連接不同的接頭，即接頭1(adaptor 1)和接頭2(adaptor 2)。接頭為雙鏈DNA 片段，且5'- 端均無磷酸基，這樣保證只有接頭中的長鏈可以與cDNA 的5'- 末端連接，兩個接頭含有可識別的序列. 接下來進(jìn)行兩次雜交。*次雜交每個測試?yán)锛尤脒^量驅(qū)動，然后變性、退火，根據(jù)雜交動力學(xué)第二定律，即豐度越高的分子退火速度越快，因此測試cDNA與驅(qū)動cDNA相同片段大都形成異源雙鏈分子，使得差異表達(dá)的單鏈分子得到富集。
第二次雜交，將進(jìn)行過雜交的兩組樣品不經(jīng)變性而直接混合，只有剩下的經(jīng)過消減并平均化了的差異表達(dá)的單鏈cDNA 可以重新結(jié)合為新的雜交體分子，這種雜交體分子兩端帶有不同的接頭1和接頭2，加入新鮮變性的驅(qū)動進(jìn)行第二輪消減雜交，進(jìn)一步富集差異表達(dá)的雜交體分子，并用DNA 酶補(bǔ)平末端，這樣差異表達(dá)的測試序列- 雜交體分子5'- 和3'- 端就有了進(jìn)行巢式PCR 所需的不同的退火位點。
zui后，進(jìn)行兩次PCR 反應(yīng)，*次PCR 只有兩端連接有不同接頭的雙鏈cDNA 片段才得以指數(shù)擴(kuò)增，而其他形式如一端有接頭，而另一端無接頭的只能線性擴(kuò)增，沒有引物結(jié)合點的不能擴(kuò)增，還有兩端為同一接頭的形成袢狀而無法獲得指數(shù)擴(kuò)增。利用巢式引物進(jìn)行第二次PCR，富集差異表達(dá)的基因片段. PCR 產(chǎn)物可以被直接插入T 載體，或者利用接頭1 上的NotI/SmaI/XmaI 位點和接頭2R 上的EagI 位點進(jìn)行定向克隆，或者接頭與cDNA 連接處的RsaI 位點平端克隆。
然后利用測序和雜交分析來分析差異表達(dá)的序列，或者用PCR 產(chǎn)物作探針來篩選DNA 文庫。
實驗周期：
一般為40個工作日，我們會根據(jù)實驗進(jìn)程通知客戶，確?？蛻粼?時間知道實驗進(jìn)展?fàn)顩r。
具有以下顯著優(yōu)點：
 ◇     操作簡便，實驗步驟少。只需一輪抑制性差減雜交和選擇性擴(kuò)增差異表達(dá)基因就可以完成實驗，不需要利用物理方法分離單、雙鏈cDNA。
 ◇     對稀有轉(zhuǎn)錄本的富集可達(dá)1,000倍以上。在完成差減雜交的同時平衡轉(zhuǎn)錄本豐度，極大地提高了獲得低豐度差異表達(dá)基因的幾率。
 ◇    只需2 μg Poly A + RNA。尤其適用于難于獲得RNA的材料。如果只有納克級的RNA，可以采用 Super SMART? PCR
 cDNA Synthesis Kit 合成高質(zhì)量的cDNA用于PCR-Select? cDNA Subtraction Kit 實驗。