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中壓制備色譜的多種分析方法探討
閱讀：1737發(fā)布時(shí)間：2022-6-20
中壓制備色譜的主要部件為輸液泵、進(jìn)樣閥、檢測(cè)器、餾分收集器等，比如瑞士公司的早期的中壓液相制備色譜，其輸液泵流速可達(dá)156mL/min，并配有阻尼器，以保證液流的穩(wěn)定；進(jìn)樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管；檢測(cè)器有紫外和示差折光檢測(cè)器，流通池體積比較大，允許大流量流動(dòng)相通過(guò)而無(wú)需分流；餾分收集器有原盤(pán)式和排式兩種，原盤(pán)式的接收管多達(dá)80個(gè)，而后者則更多；色譜柱內(nèi)徑9-105mm，長(zhǎng)度250-1760mm不等。
對(duì)于一般中壓制備色譜，當(dāng)色譜柱直徑較大時(shí)，柱頭往往設(shè)計(jì)成錐形或有類(lèi)似于傘狀的液流導(dǎo)向結(jié)構(gòu)，使得當(dāng)大量樣品進(jìn)入到柱頭上時(shí)，能迅速地分散到整個(gè)柱橫截面上，及時(shí)被流動(dòng)相沖走，避免了因樣品的局部過(guò)濃而引起柱超負(fù)荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠(如Sepharose CL，Superose等)，聚合物微球，復(fù)合材料介質(zhì)或硬質(zhì)SiO2基體的化學(xué)鍵合相等，粒徑一般在25～40um（常用的填料尺寸是15-25um，25-40um或40-63um），可采用濕法或干法裝柱。
中壓制備色譜根據(jù)液相方法的流速和洗脫時(shí)間計(jì)算溶劑消耗量，裝流動(dòng)相的容器應(yīng)清潔。含水流動(dòng)相建議在實(shí)驗(yàn)前配制，并注意流動(dòng)相的保質(zhì)期。色譜柱都有一定的pH使用范圍，流動(dòng)相的pH應(yīng)在色譜柱耐受的pH范圍內(nèi)。長(zhǎng)時(shí)間停用或者更換流動(dòng)相等，可能導(dǎo)致溶劑管路或溶劑泵被引入氣泡，需要先排出氣泡再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。操作方法：打開(kāi)溶劑泵的排空閥，開(kāi)啟溶劑泵的流速，排出溶劑管路和泵中氣泡，直至排出的廢液連續(xù)無(wú)間斷，表明氣泡已排干凈。
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