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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 15005ES50 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè) |
產品介紹
酶切點位
5'-GGTCTC(N)1↓-3'
3'-CCAGAG(N)5↑-5'
產品簡介
FuniCut™系列內切酶是通過基因工程重組技術，可在5～15 min內精確完成DNA切割的快速限制性內切酶，適用于快速切割質粒DNA、PCR產物、基因組DNA 等。FuniCut™系列快速內切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡化了酶切反應體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
產品信息
貨號 | 15005ES50 |
規(guī)格 | 50 T |
識別位置 | 5'-GGTCTC(N)1↓-3' 3'-CCAGAG(N)5↑-5' |
推薦反應條件 | 1×FuniCut™ 緩沖液；最適37℃孵育 |
酶活 | 20 U/μL |
失活條件 | 80℃孵育20 min |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 15005ES50 |
15005-A | FuniCut™ BsaI | 50 μL |
15005-B | 10×FuniCut™ Buffer | 1 mL |
15005-C | 10×FuniCut™ Color Buffer* | 1 mL |
*10×FuniCut™ Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產物直接用于凝膠電泳。FuniCut™ Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。
儲存條件
-25～-15℃保存，有效期2年。
注意事項
1.3 h孵育未表現(xiàn)星號活性，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。
2.受CpG甲基化影響，序列重疊，剪切阻斷。
3.受Dcm甲基化影響，序列重疊，剪切阻斷。
4.受EcoBI甲基化影響，序列重疊，剪切阻斷。
5.為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
6.本產品僅作科研用途。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應液（冰上操作）
組分 | 質粒DNA | PCR產物 | 基因組DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL (～1 μg) | 10 μL (～0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FuniCut™ BsaI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本體系指已純化后的PCR產物。未純化的PCR產物具備一定的離子強度，10×FuniCutTM Buffer加入量可適當減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗，酶切前需純化PCR產物。
2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴。
3) 37℃孵育15 min（質粒），或15～30 min（PCR產物），或30～60 min（基因組DNA）。
4) 80℃孵育20 min 即可使酶失活，停止反應（可選）。
5) 如果使用FuniCut™ Color Buffer進行酶切反應，得到的產物可直接上樣電泳。
2. 雙酶切或多酶切
1) 每種內切酶的用量為1 μL，并根據需要適當擴大反應體系。
2) 所有內切酶的體積總和不得超過總反應體系的1/10。
3) 如果選用的幾種內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進行孵育。
3. 質粒的擴大反應體系
組分 | 體積（20 μL） | 體積（20 μL） | 體積（50 μL）* |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
FuniCut™ BsaI | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
*如果總反應體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時間。
4. 不同DNA中的識別位點數(shù)
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
2 | 0 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 |
5. 甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無影響 | 序列重疊，剪切阻斷 | 序列重疊，剪切阻斷 | 無影響 | 序列重疊，剪切阻斷 |
6. 不同反應緩沖液中的活性*
反應緩沖液 | FuniCut™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart® Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
*活性數(shù)據來自翌圣生物限制酶標準反應體系下的檢測。
Ver.CN20230706
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