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- 上海市 所在地
訪問次數(shù):898更新時(shí)間:2023-03-15 09:16:13
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*0 Chemically Competent Cell
(*0化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞)
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格(元) |
*0 Chemically Competent Cell (*0化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞) | 11801ES76 | 100 μl×5管 | -80℃ | 110.00 |
11801ES80 | 100 μl×10管 | -80℃ | 180.00 |
產(chǎn)品描述
本品是采用大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。本品使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg,廣泛適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。
*感受態(tài)細(xì)胞基因型:F-mcrA△(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ△M15△lacX74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (Strr) endA1 nupG。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
11801ES76(100 μl × 5管) | 11801ES80(100 μl × 10管) | ||
11801-A | *0感受態(tài)細(xì)胞 | 100 μl × 5 | 100 μl × 10 |
11801-B | pUC19(0.1 ng/μl) | 10 μl | 10 μl |
使用方法
- 取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
注:一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用,應(yīng)注意所用的DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
- 向100 μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA,輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30min。
- 將離心管置于42℃水浴中放置60-90s,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3min,該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
- 向離心管中加入900μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45 min(150 rpm),目的是促使菌體復(fù)蘇,抗性基因表達(dá)。
- 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min,待液體被吸收后,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 h。
注:涂布菌液多少可根據(jù)轉(zhuǎn)化DNA量來(lái)調(diào)整。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心后吸除部分培養(yǎng)液,重新懸浮菌體后將其涂布在一個(gè)平板上。剩余菌液可置于4℃保存,一周之內(nèi)可重新涂板。
運(yùn)輸與保存方法
干冰運(yùn)輸。
*0感受態(tài)細(xì)胞-80℃保存,pUC19質(zhì)粒-20℃保存。有效期半年。
注意事項(xiàng)
感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃,不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率