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組織乙酰輔酶A羧化酶活性光度法定量 檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
閱讀：1701 發(fā)布時間：2015-8-25主要用途
組織乙酰輔酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性光度法定量檢測試劑是一種旨在通過底物乙酰輔酶A和碳酸氫鹽受到乙酰輔酶A羧化酶的催化反應(yīng)后，進而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng)，測定產(chǎn)生ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應(yīng)， 即采用光度法測定其氧化后峰值的變化，以分析組織裂解樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品（動物、人體）、部分或*純化酶樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，高度敏感。
技術(shù)背景
乙酰輔酶A羧化酶（Acetyl CoA Carboxylase；ACC；EC6.4.1.2），又稱為乙酰輔酶A碳酸氫鹽連接酶（Acetyl CoA：bicarbonate ligase-ATP），是ATP依賴性含生物素酶，參與脂肪酸生物合成。哺乳動物乙酰輔酶A羧化酶單體分子量為225－250Kd，含有許多磷酸化位點，以及1個生物素輔基位點、2個催化位點和1個異構(gòu)（allosteric）位點。乙酰輔酶A羧化酶催化生物素輔基（prosthetic group）的羧基化反應(yīng)，然后將生物素上的羧基轉(zhuǎn)移到輔酶A上，產(chǎn)生丙二酰輔酶A（malonyl CoA），成為長鏈脂肪酸合成前的關(guān)鍵步驟。AMP活化蛋白激酶（AMP-Activated Kinase；AMPK）調(diào)節(jié)該酶的活性，而十四烷基氧糠酸（5-(tetradecyloxy)-2-furoic acid；TOFA）抑制該酶的活性。基于底物乙酰輔酶A（acetyl CoA）和碳酸氫鹽，在ATP的存在下，受到乙酰輔酶A羧化酶的催化，獲得產(chǎn)物丙二酰輔酶A和ADP，進而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）反應(yīng)系統(tǒng)中，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的變化（340nm），來定量分析乙酰輔酶A羧化酶的活性。其反應(yīng)方式為：
Acetyl CoA Carboxylase
Acetyl Co-A + ATP + HCO3 → Malonyl CoA + ADP + Pi
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
（高吸收峰） （低吸收峰）
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 60毫升
裂解液（Reagent B） 10毫升
緩沖液（Reagent C） 20毫升
酶促液（Reagent D） 2毫升
反應(yīng)液（Reagent E） 2毫升
底物液（Reagent F） 2毫升
陰性液（Reagent G） 500微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存 清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反復凍融；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織
（微型）臺式離心機：用于樣品預(yù)處理
1厘米光徑比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器
分光光度儀或酶標儀：用于樣品光度分析