奧林巴斯醫(yī)用研究級熒光CX43相差顯微鏡的操作步驟主要包括以下環(huán)節(jié):
一、開機與檢查
放置顯微鏡:將顯微鏡放置在平整、穩(wěn)定的桌面或?qū)嶒炁_上,確保顯微鏡穩(wěn)定不晃動,且使用環(huán)境無塵無污染,以免影響觀察精度。
接通電源:打開電源開關(guān),確保顯微鏡能夠正常啟動和工作。
檢查光學(xué)部件:檢查物鏡、目鏡、聚光鏡等光學(xué)部件是否清潔無污物,如有必要,使用鏡頭紙或吹風(fēng)機輕輕吹拂進(jìn)行清潔。
二、樣品準(zhǔn)備與放置
采集樣品:根據(jù)實驗需求,采集新鮮的、具有代表性的樣品。
制作樣品:將樣品制作成涂片或切片,確保樣品平整且薄,以便光線能夠穿透并形成清晰的圖像。對于熒光觀察,如果樣品本身沒有自發(fā)熒光,還需要進(jìn)行熒光標(biāo)記。
放置樣品:將載有樣品的載玻片放在載物臺上,用樣品夾牢固夾住樣品,以防其移動或脫落。奧林巴斯CX43的優(yōu)勢在于其多用樣品夾適用于多種樣品類型,可以單手快速地將樣品放入或取出。
三、顯微鏡調(diào)節(jié)與觀察
調(diào)節(jié)載物臺:通過調(diào)節(jié)載物臺的X/Y向移動,以及W/D(行程)調(diào)節(jié),使樣品能夠清晰地展現(xiàn)在視野內(nèi)。
調(diào)節(jié)光源:根據(jù)需要調(diào)節(jié)光源的亮度和角度,確保光線能夠均勻且穩(wěn)定地照射在樣品上。如果是熒光觀察,則需要打開熒光光源,并讓其預(yù)熱一段時間以達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。
選擇物鏡:根據(jù)實驗需求,選擇合適的物鏡進(jìn)行初步觀察。通常從低倍物鏡開始,如10倍或20倍物鏡。奧林巴斯CX43顯微鏡的物鏡具有平場消色差的功能,倍數(shù)也可實現(xiàn)10倍、40倍、100倍等的變化。
粗調(diào)焦:使用粗調(diào)焦旋鈕,將物鏡移動到接近樣品的位置,以便快速找到成像范圍。
細(xì)調(diào)焦:當(dāng)粗調(diào)焦找到成像范圍后,使用細(xì)調(diào)焦旋鈕進(jìn)行微調(diào),直至成像清晰。奧林巴斯CX43高效的調(diào)焦旋鈕可以使操作者在使用顯微鏡觀察的同時,將雙手及前臂放在觀察臺上,有助于提升操作舒適度。
低倍觀察:在低倍鏡下,快速找到樣品的大致位置,并調(diào)節(jié)焦距和照明,使樣品邊緣輪廓清晰可見。
相差觀察:如果需要進(jìn)行相差觀察,應(yīng)選擇合適的相差物鏡(如20倍、40倍相差物鏡),并轉(zhuǎn)動相差顯微鏡的相差調(diào)節(jié)環(huán),使相差環(huán)與物鏡上的相差板對齊,以獲得最佳的相差效果。
熒光觀察:
選擇合適的熒光濾光片組:根據(jù)所使用的熒光染料或熒光蛋白的激發(fā)和發(fā)射光譜,選擇相應(yīng)的熒光濾光片組。
切換到熒光光路:通過顯微鏡上的光路切換裝置,將光路從明場或其他觀察模式切換到熒光模式。
調(diào)節(jié)激發(fā)光強度:使用熒光光源的強度調(diào)節(jié)旋鈕,將激發(fā)光強度調(diào)整到合適的水平。
高倍觀察:切換到高倍物鏡(如40倍、60倍或100倍)進(jìn)行更細(xì)致的觀察。在切換物鏡時,應(yīng)從側(cè)面觀察物鏡與樣本的距離,避免物鏡與樣本相撞。在高倍鏡下,可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)光圈和聚光鏡,使光線適中,確保樣品圖像清晰且亮度適宜。
四、圖像記錄與處理
記錄圖像:如有需要,可以通過連接成像系統(tǒng)(如數(shù)字?jǐn)z像頭),將觀察到的圖像傳輸?shù)诫娔X上進(jìn)行拍照、錄像、編輯等操作。同時,記錄觀察時間、樣本來源、觀察條件以及觀察到的樣品特征等信息。
圖像分析:利用圖像分析軟件對拍攝的圖像進(jìn)行測量、分析,如測量細(xì)胞大小、熒光強度等,還可進(jìn)行圖像增強、降噪等處理,以提高圖像質(zhì)量。
五、關(guān)機與清理
關(guān)閉光源:觀察結(jié)束后,先關(guān)閉熒光光源或其他光源的電源,以延長光源的使用壽命。
切換回其他光路模式:將顯微鏡的光路切換回明場或其他常用的觀察模式。
取下樣品:小心取下樣品,清理載物臺,保持顯微鏡的清潔和整潔。
關(guān)閉顯微鏡電源:最后關(guān)閉顯微鏡的總電源開關(guān)。
請注意,在使用奧林巴斯醫(yī)用研究級熒光CX43相差顯微鏡時,應(yīng)嚴(yán)格按照操作手冊進(jìn)行操作,并確保實驗環(huán)境的整潔與安全。
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