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小鼠琥珀酸脫氫酶（SDH）含量分析試劑盒說明書
閱讀：168 發(fā)布時間：2016-3-24| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 180.9KB |
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小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)酶聯(lián)免疫試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
7μmol/L -260μmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中琥珀酸脫氫酶(SDH)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)水平。用純化的小鼠琥 珀酸脫氫酶(SDH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入琥珀酸脫 氫酶(SDH)，再與 HRP 標(biāo)記的琥珀酸脫氫酶(SDH)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合 物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作 用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的琥珀酸脫氫酶(SDH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)濃度。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品（480μmol/L） | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。