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ELISA法手工測定的影響因素
閱讀：2337 發(fā)布時(shí)間：2022-1-12ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，因而多年來廣泛應(yīng)用于血站和醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室中，但在測定中常會(huì)出現(xiàn)一些誤差和問題。我們通過幾年的實(shí)驗(yàn)觀察，認(rèn)為影響結(jié)果的因素有如下方面。
1 試劑盒
（1）抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價(jià)降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對(duì)雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽性。（2）酶結(jié)合物濃度過高，也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。
2 試驗(yàn)儀器
（1）加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不精確，會(huì)使結(jié)果忽高忽低。（2）每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞。
3 操作
（1）檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低。（2）加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。（3）洗滌不充分，會(huì)使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性。（4）比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí)，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高。（5）抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到*平衡，依賴于溫度與時(shí)間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度?？傊?，由于ELISA實(shí)驗(yàn)的影響因素較多，在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì)，避免和排除各種因素的影響，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。