目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1625-100T/96S錳過氧化物酶（Mnp）活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC1625 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 錳過氧化物酶（Mnp）活性檢測 |
錳過氧化物酶（Mnp）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1625
規(guī)格：100T/96S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體120mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體3mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體200μL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液配制：
試劑四：臨用前根據(jù)實驗所需量按照試劑四（μL）：蒸餾水（μL）=1:49的比例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。
產品說明：
錳過氧化物酶（Mnp）（EC1.11.1.13）是一種普遍存在于細菌和真菌中的微生物木質素分解酶，在微生物木質素分解系統(tǒng)中起著關鍵作用，它可以有效的降解木質素以及廢水和土壤中比較難降解的化合物，在生物制漿、生物漂白和污染物的生物降解等工業(yè)領域具有廣泛應用。
錳過氧化物酶在Mn2+環(huán)境下，可將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，四鄰甲氧基連酚在465nm處有吸收峰，通過檢測465nm處吸光值的變化，可測定錳過氧化物酶的活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、超聲波細胞破碎儀、可調式移液器、研缽/勻漿器、微量玻璃比色皿/96孔板、震蕩儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、 組織：按照樣本質量（g）：試劑一體積（mL）為1:5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿；10000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2、 細菌或細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為 500-1000:1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率30%或300W，超聲 3s，間隔 7s，總時間3min），10000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測。
3、液體樣本：直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。
二、測定步驟
1、可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至465nm，可見分光光度計需用蒸餾水調零。
2、測定前根據(jù)實驗用量取出部分試劑一、試劑二、試劑三和試劑四置于37℃（哺乳動物）或25℃（其他動物）預熱10min以上。
3、加樣表（在微量玻璃比色皿/96孔板中依次加入下列試劑)：
試劑名稱（μL） | 測定管 |
樣本（μL） | 20 |
試劑一（μL） | 100 |
試劑二（μL） | 20 |
試劑三（μL） | 40 |
試劑四（μL） | 20 |
將上述試劑分別加入微量玻璃比色皿/96孔板后迅速吹打混勻，記錄第30s的吸光值A1以及10min30s時的吸光值A2，計算ΔA =A2-A1。若一次性測定樣本過多，可根據(jù)使用量將試劑一、二、三、四按5:1:2:1比例配成工作液后進行預熱，測定時按照20μL樣本+180μL工作液加入微量玻璃比色皿/96孔板進行測定。
三、Mnp活力的計算
A．用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
1.按樣本蛋白質濃度計算
酶活定義：pH4.5條件下，每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活單位。
Mnp活性（U/mg prot）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣×Cpr)÷T= 82.64×ΔA÷Cpr
2.按樣本質量計算
酶活定義：pH4.5條件下，每mg組織每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活單位。
Mnp活性（U/g 質量）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 82.64×ΔA÷W
3.按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義：pH4.5條件下，每104細菌/細胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活單位。
Mnp活性（U/104 cell）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)÷T= 82.64×ΔA÷細胞數(shù)量
4.按照樣本體積計算
酶活定義：pH4.5條件下，每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。
Mnp 活性（U/mL）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V樣÷T= 82.64×ΔA
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d:比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.0002L；V樣：加入樣本體積，0.02mL，V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，10 min；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。
B．用96孔UV板測定的計算公式如下：
1.按樣本蛋白質濃度計算
酶活定義：pH4.5條件下，每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活單位。
Mnp活性（U/mg prot）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣×Cpr)÷T=137.74×ΔA÷Cpr
2.按樣本質量計算
酶活定義：pH4.5條件下，每g組織每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活單位。
Mnp活性（U/g 質量）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T=137.74×ΔA÷W
3. 按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義：pH4.5條件下，每104細菌/細胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活單位。
Mnp活性（U/104 cell）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)÷T=137.74×ΔA÷細胞數(shù)量
4．按照樣本體積計算
酶活定義：pH4.5條件下，每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。
Mnp 活性（U/mL）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V樣÷T= 137.74×ΔA
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100 L/mol/cm；d:比色皿光徑，0.6cm；V反總：反應總體積，0.0002L；V樣：加入樣本體積，0.02mL，V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，10 min；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。
注意事項：
當A1大于1.5或者ΔA大于0.6（酶標儀ΔA大于0.4）時，建議將樣本用試劑一稀釋后測定；當ΔA過小時，可以適當加大樣本量后重新進行測定。注意同步修改計算公式。
實驗實例：
取0.1002g杏鮑菇加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清置冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算A1=0.055，A2=0.064，ΔA=A2-A1=0.009，按樣本質量計算酶活得：
Mnp 活性（U/g 質量）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V樣÷T=12.37U/g 質量。
參考文獻：
[1] Chowdhary P, Shukla G, Raj G, et al. Microbial manganese peroxidase: a ligninolytic enzyme and its ample opportunities in research[J]. SN Applied Sciences, 2019, 1(1):45.
[2] Rogalski J, Lundell T, Leonowicz A, et al. Production of laccase, lignin peroxidase and manganese-dependent peroxidase by various strains of Trametes versicolor depending on culture conditions[J]. Polish Society of Microbiologists, 1991, 40(3-4):221-234.
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錳過氧化物酶（Mnp）活性檢測試劑盒 微量法 錳過氧化物酶（Mnp）活性檢測試劑盒 微量法
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