目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5505-100T/48S土壤碳酸酐酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC5505 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 土壤碳酸酐酶活性檢測 |
土壤碳酸酐酶（S-CA）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC5505
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體40mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前取一支試劑二，先加入650μL丙酮使粉劑充分溶解，再加入6.7mL蒸餾水。未用完的試劑分裝保存，-20℃可以分裝保存1周，避免反復(fù)凍融。
2、 標準品：5μmol/mL 酚標準液。臨用前取50μL的5μmol/mL 酚標準液于中，加入750μL蒸餾水充分混合，配置成0.3125 μmol/mL的酚標準液。
產(chǎn)品說明：
碳酸酐酶（Carbonic Anhydrase, CA, EC4.2.1.1）是一種以Zn2+為活性中心的金屬酶，可用來高效催化CO2的可逆水合反應(yīng)：CO2+H20?HCO3-+H+，催化速率可達自然條件下的107倍，是目前已知催化速率最快的酶之一。
碳酸酐酶可催化乙酸對硝基苯酯反應(yīng)生成對硝基苯*，通過檢測405nm處吸光值上升速率反映碳酸酐酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、30-50目篩、研缽、分析天平、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、甲苯、蒸餾水和冰。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過 30~50目篩。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，可見分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一使用前37℃預(yù)熱15min。
3、 標準管測定
（1） 標準管測定：在1.5mL EP管內(nèi)中加入80μL標準液，320μL試劑一，充分混勻后，吸取0.2mL于微量玻璃比色皿/96孔板中測定405nm處吸光值，記作A標準。
（2） 標準空白管測定：在1.5mL EP管內(nèi)中加入80μL蒸餾水，320μL試劑一，充分混勻后，吸取0.2mL于微量玻璃比色皿/96孔板中測定405nm處吸光值，記作A標準空白。
（3） 計算?A標準=A標準-A標準空白。（標準管和標準空白管只需做1-2次。）
4、 操作表：（在1.5mLEP管內(nèi)加入）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 0.1g | 0.1g |
甲苯 | 20 | 20 |
充分振蕩使土壤呈潮濕狀態(tài)，常溫靜置15min | ||
試劑一 | 300 | 300 |
煮沸10min，冰水冷卻 | ||
試劑二 | 80 | 80 |
37℃反應(yīng)5min后立即放入冰水浴中，之后15000g，4℃離心10min。吸取0.2mL于微量玻璃比色皿/96孔板中測定405nm處吸光值，記作A測定，A對照。計算?A =A測定-A對照。（每個測定管對應(yīng)一個對照管。） | ||
三、土壤CA活性計算
按樣本質(zhì)量計算
單位的定義：37℃，每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 對硝基苯*定義為一個酶活力單位。
S-CA活性（U/g 質(zhì)量）= C標×?A÷?A標準×V標準÷W÷T×F=0.005×?A÷?A標準÷W×F
C標：標準品濃度，0.3125μmol/mL；V標準：反應(yīng)體系中加入的標準液體積，0.08mL；T：反應(yīng)時間，5min； W：樣本質(zhì)量，g； F：樣本稀釋倍數(shù)。
注意事項：
1、 如果A測定大于1.5或者?A大于0.8，可以減少樣本量或者縮短37℃酶促反應(yīng)時間；?A小于0.02，可以加大樣本量或者延長37℃酶促反應(yīng)時間。注意計算時同步修改計算公式。
2、 如果離心后待測的上清依然渾濁，可嘗試加大離心轉(zhuǎn)速或延長時間，例如20000g，4℃，離心10min。
實驗實例：
1、 稱取0.1016g土壤樣本16號，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A =A測定-A對照=0.353-0.227=0.126，?A標準=A標準-A標準空白=0.65-0.046=0.604，帶入公式計算：
S-CA活性（U/g 質(zhì)量）=0.005×?A÷?A標準÷W×F =0.010 U/g 質(zhì)量
2、 稱取0.1056g土壤樣本62號，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A =A測定-A對照=0.577-0.271=0.306，?A標準=A標準-A標準空白=0.65-0.046=0.604，帶入公式計算：
S-CA活性（U/g 質(zhì)量）=0.005×?A÷?A標準÷W×F =0.024 U/g 質(zhì)量
參考文獻：
[1] Li W ,Yu L J , Yuan D X , et al. A study of the activity and ecological significance of carbonic anhydrase from soil and its microbes from different karst ecosystems of Southwest China[J]. Plant and Soil, 2005, 272(1):133-141.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0150/BC0155 土壤纖維素酶（S-CL）活性檢測試劑盒
BC0160/BC0165 土壤β-葡萄糖苷酶（S-β- GC）活性檢測試劑盒
土壤碳酸酐酶活性檢測試劑盒 微量法 土壤碳酸酐酶活性檢測試劑盒 微量法
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