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小鼠前列腺素 E2(PGE2)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

閱讀:591          發(fā)布時間:2009-12-1
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小鼠前列腺素 E2(PGE2)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:小鼠前列腺素 E2(PGE2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中前列腺素 E2(PGE2)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本中小鼠前列腺素 E2(PGE2)水平。用純化的小鼠
前列腺素 E2(PGE2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入前列腺素
E2(PGE2),和HRP 標(biāo)記的羊抗鼠抗原,使它們競爭結(jié)合,,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯
色。樣本顏色的深淺和樣品中的前列腺素 E2(PGE2)的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波
長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠前列腺素 E2(PGE2)的含量。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品(450ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為300ng/L,200ng/L ,100ng/L,50ng/L, 25ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣
品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60 分鐘。

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