諾博萊德 葉綠體蛋白提取試劑盒

NobleRyder P5058 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

產(chǎn)品貨號(hào)：P5058

產(chǎn)品名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5058 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。葉綠體提取試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時(shí)由于凍存過(guò)程中大部分葉綠體會(huì)被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的葉綠體，回收率提高，純度高，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。非酶法的提取試劑盒提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在1小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒(méi)有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的, 由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。

葉綠體蛋白提取試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。

本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時(shí)由于凍存過(guò)程中大部分葉綠體會(huì)被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的葉綠體，回收率提高，純度高，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。非酶法的提取試劑盒提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒(méi)有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、TritonX-100、chaps 等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過(guò)透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry, MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套、100um 細(xì)胞篩。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、葉綠體蛋白提?。?/span>

1. 提取液準(zhǔn)備：

將試劑 C1 和試劑 C2 混合，配成蛋白提取液 C，充分混勻備用。每 500ul 蛋白提取液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 蛋白提取液 C 置 4℃保存，長(zhǎng)期不用的可以分裝后-20℃保存。

2) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

3) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取 1g 新鮮植物樣本葉片，洗凈擦干后去除葉梗和粗脈。用手術(shù)jian刀盡可能剪碎。

3. 加入 2ml PBS 用組織攪碎機(jī)/勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。

4. 將勻漿用 100um 細(xì)胞篩過(guò)濾。

【注】：

1) 沒(méi)有細(xì)胞篩的話，在 4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團(tuán)組織塊等沉降，收集細(xì)胞上清，棄組織沉淀。

2) 有些含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將 1ml 吸頭尖稍微剪掉一點(diǎn)使用。

5. 將濾液在 3000×g 條件下離心 10 分鐘，收集沉淀。

6. 在沉淀中加入 500ul 提取液 A，充分混勻

【注】：

1) 培養(yǎng)細(xì)胞可以在 1000×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)

胞后用 PBS 洗滌 2 次，然后直接加入提取液 A 重懸。

2) 大約每 300ul 細(xì)胞壓積（沉淀體積）中加入 1ml 提取液 A。

7. 將懸液置振蕩器上 37℃或室溫振蕩 12-72 小時(shí)。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保證提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

3) 根據(jù)下游葉綠體的應(yīng)用選擇合適的溫度。最高可以至 55℃，提高溫度至 55℃可以縮短試劑 A 處理時(shí)間。

4) 不同類型的植物樣本需要處理的時(shí)間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時(shí)間短。

5) 部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長(zhǎng)時(shí)間。可以延長(zhǎng)至 72 小時(shí)以上處理以提高葉綠體得率。

8. 在 3000×g 條件下離心 10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

9. 在沉淀中加入 0.5ml 提取液 B，充分混勻。

10. 置振蕩器振蕩 20 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保證提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻

即可。

11. 在 200×g 力離心 2 分鐘。棄沉淀，取上清。

12. 在 800×g 力離心 2 分鐘。棄沉淀，取上清。

13. 將上清 3000×g 力離心 10 分鐘。棄上清，收集沉淀。

14. 在沉淀中加入 100-400ul 葉綠體蛋白提取液 C，充分混勻。

【注】：

1) 每 500ul 蛋白提取液 C 加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物。

15. 在 4℃條件下振蕩 20-30 分鐘。

【注】：

1) 試劑 C 處理時(shí)間根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整。至葉綠體充分裂解，離心后無(wú)明顯大量葉綠體沉淀。

16. 在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘。

17. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到葉綠體總蛋白。

18. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

19. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于不能含有去污劑/鹽的下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2) 經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸；如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

葉綠體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

P5058  葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法  50T/100T