S-180-LUC小鼠肉瘤
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/12 15:33:51
- 訪問次數(shù) 32
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產(chǎn)品名稱：S-180-LUC小鼠肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記、S-180-LUC小鼠肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記、S-180-LUC小鼠肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記、S-180-LUC小鼠肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記； 
常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理方式
1.收到常溫細(xì)胞后，及時(shí)拍照記錄有無(wú)漏液/瓶身破損現(xiàn)象。
2.鏡下觀察有無(wú)微生物污染現(xiàn)象，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無(wú)染菌現(xiàn) 象,方便后續(xù)售后處理。
3.用75%酒精擦拭瓶身，置于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4h 后進(jìn)行傳代操作。
4.觀察細(xì)胞密度若超過80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代，請(qǐng)根據(jù)實(shí) 際情況決定)，傳代推薦比例1：2到1：3(按實(shí)際收貨細(xì)胞密度決定，若不確定可聯(lián)系技術(shù)支持);若細(xì)胞密度不到80%則可取出部分培養(yǎng)基留6ml左右原瓶培養(yǎng) 基繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細(xì)胞。
5. 由于氣溫，運(yùn)輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的，請(qǐng)將細(xì)胞離心收集后在離心管中 消化后進(jìn)行傳代 ，或及時(shí)聯(lián)系技術(shù)支持進(jìn)行指導(dǎo)傳代。
6.若觀察到異?；蛘邔?duì)細(xì)胞有疑問，請(qǐng)及時(shí)跟代理商或者我們聯(lián)系；對(duì)于細(xì)胞培 養(yǎng)操作及培養(yǎng)注意事項(xiàng)有疑問的，可跟我們的技術(shù)支持交流。
附:收到貼壁細(xì)胞漂浮處理方法 (部分細(xì)胞由于貼壁松散，會(huì)出現(xiàn)運(yùn)輸后漂浮，冬天氣溫低時(shí)也會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮，屬于不可避免因素，正確處理后都可以正常生長(zhǎng))
1、將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心收集細(xì)胞 (1200rpm 3min) 去除 舊培養(yǎng)基；
2、用 PBS 重懸細(xì)胞，將所有細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次離心 (1200rpm 3min) 去 除 PBS；
3、加入1ml左右0.25%重懸細(xì)胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養(yǎng) 箱消化 細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時(shí)間 (TM3、TM4、293 系列約 1~2 分鐘)；
4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入 3-5ml 含 血清的培 養(yǎng)基混勻以終止消化，離心 (1200rpm 3min) 去除；
5、加入 5ml 左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入無(wú)菌培養(yǎng)瓶/皿中；
6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞，若有 3-5 個(gè)成團(tuán)的小細(xì)胞 團(tuán)可不用 重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。
2.鏡下觀察有無(wú)微生物污染現(xiàn)象，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無(wú)染菌現(xiàn) 象,方便后續(xù)售后處理。
3.用75%酒精擦拭瓶身，置于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4h 后進(jìn)行傳代操作。
4.觀察細(xì)胞密度若超過80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代，請(qǐng)根據(jù)實(shí) 際情況決定)，傳代推薦比例1：2到1：3(按實(shí)際收貨細(xì)胞密度決定，若不確定可聯(lián)系技術(shù)支持);若細(xì)胞密度不到80%則可取出部分培養(yǎng)基留6ml左右原瓶培養(yǎng) 基繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細(xì)胞。
5. 由于氣溫，運(yùn)輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的，請(qǐng)將細(xì)胞離心收集后在離心管中 消化后進(jìn)行傳代 ，或及時(shí)聯(lián)系技術(shù)支持進(jìn)行指導(dǎo)傳代。
6.若觀察到異?；蛘邔?duì)細(xì)胞有疑問，請(qǐng)及時(shí)跟代理商或者我們聯(lián)系；對(duì)于細(xì)胞培 養(yǎng)操作及培養(yǎng)注意事項(xiàng)有疑問的，可跟我們的技術(shù)支持交流。
附:收到貼壁細(xì)胞漂浮處理方法 (部分細(xì)胞由于貼壁松散，會(huì)出現(xiàn)運(yùn)輸后漂浮，冬天氣溫低時(shí)也會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮，屬于不可避免因素，正確處理后都可以正常生長(zhǎng))
1、將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心收集細(xì)胞 (1200rpm 3min) 去除 舊培養(yǎng)基；
2、用 PBS 重懸細(xì)胞，將所有細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次離心 (1200rpm 3min) 去 除 PBS；
3、加入1ml左右0.25%重懸細(xì)胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養(yǎng) 箱消化 細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時(shí)間 (TM3、TM4、293 系列約 1~2 分鐘)；
4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入 3-5ml 含 血清的培 養(yǎng)基混勻以終止消化，離心 (1200rpm 3min) 去除；
5、加入 5ml 左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入無(wú)菌培養(yǎng)瓶/皿中；
6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞，若有 3-5 個(gè)成團(tuán)的小細(xì)胞 團(tuán)可不用 重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。
貼壁細(xì)胞傳代
1. 從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄；
2. 用不含鈣、鎂的沖洗細(xì)胞 (每10cm2培養(yǎng)表面積約2mL溶液)；從與貼壁細(xì)胞層相對(duì)的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動(dòng)細(xì)胞 層，前后搖晃容器數(shù)次 (注：沖洗步驟可去除可能抑制解離劑作用的少量 血清、鈣和鎂) ；
3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的解離劑；試量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層(每10cm2大約0.5mL)；
4. 輕輕搖晃容器，使試劑覆蓋細(xì)胞層；吸出多余解離試劑，T25 細(xì)胞
培養(yǎng)瓶留 200ul 左右即可；
5. 將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘 ( 請(qǐng)注意實(shí)際孵育時(shí)間根據(jù)所用細(xì)胞
系不同而有所差異) ；
6. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況；如果解離程度未達(dá) 90%，可將孵育時(shí)間 延長(zhǎng)幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況；也可輕輕拍打培養(yǎng)容器以 加快細(xì)胞解離；
7. 細(xì)胞解離程度大于等于 90%時(shí)，傾斜培養(yǎng)容器，使細(xì)胞上液體盡快流 盡；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基；吹打細(xì)胞層表面 數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；
8. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL 無(wú)菌離心管中，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘
(請(qǐng)注意離心速度和時(shí)間依細(xì)胞種類不同而有所差異) ；
9. 用最少體積的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液按照 推薦比例稀釋，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，把
細(xì)胞放回培養(yǎng)箱 (注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋 旋松，以便進(jìn)行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣 性瓶蓋) 。
1. 從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄；
2. 用不含鈣、鎂的沖洗細(xì)胞 (每10cm2培養(yǎng)表面積約2mL溶液)；從與貼壁細(xì)胞層相對(duì)的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動(dòng)細(xì)胞 層，前后搖晃容器數(shù)次 (注：沖洗步驟可去除可能抑制解離劑作用的少量 血清、鈣和鎂) ；
3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的解離劑；試量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層(每10cm2大約0.5mL)；
4. 輕輕搖晃容器，使試劑覆蓋細(xì)胞層；吸出多余解離試劑，T25 細(xì)胞
培養(yǎng)瓶留 200ul 左右即可；
5. 將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘 ( 請(qǐng)注意實(shí)際孵育時(shí)間根據(jù)所用細(xì)胞
系不同而有所差異) ；
6. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況；如果解離程度未達(dá) 90%，可將孵育時(shí)間 延長(zhǎng)幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況；也可輕輕拍打培養(yǎng)容器以 加快細(xì)胞解離；
7. 細(xì)胞解離程度大于等于 90%時(shí)，傾斜培養(yǎng)容器，使細(xì)胞上液體盡快流 盡；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基；吹打細(xì)胞層表面 數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；
8. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL 無(wú)菌離心管中，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘
(請(qǐng)注意離心速度和時(shí)間依細(xì)胞種類不同而有所差異) ；
9. 用最少體積的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液按照 推薦比例稀釋，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，把
細(xì)胞放回培養(yǎng)箱 (注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋 旋松，以便進(jìn)行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣 性瓶蓋) 。
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