人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因GRO-β試劑盒
人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因GRO-β試劑盒,通常以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù)為核心,是科研與臨床檢測(cè)中用于精準(zhǔn)定量測(cè)定樣本內(nèi) GRO-β 含量的有力工具。其全稱為人 CXCL2/GRO-β ELISA Kit,在生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。
試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心 ELISA 技術(shù)。首先,將特異性抗人 GRO-β 的單克隆抗體預(yù)包被在高親和力的 96 孔聚苯乙烯酶標(biāo)板上。當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本后,樣本中的 GRO-β 蛋白會(huì)與固相化的抗體特異性結(jié)合。經(jīng)過(guò)洗滌步驟去除未結(jié)合的雜質(zhì)后,加入生wu素化的檢測(cè)抗體,該抗體可與已結(jié)合在固相抗體上的 GRO-β 進(jìn)一步結(jié)合,形成 “固相抗體 - GRO-β - 生wu素化檢測(cè)抗體” 的夾心結(jié)構(gòu)。再次洗滌后,加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素,由于鏈霉親和素與生wu素具有ji高的親和力,二者特異性結(jié)合。此時(shí)加入底物 3,3',5,5'- 四甲基聯(lián)苯胺(TMB),在 HRP 的催化作用下,TMB 發(fā)生顯色反應(yīng),由無(wú)色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色,加入終止液后,顏色變?yōu)辄S色。在 450nm 波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng) 570 - 630nm)處測(cè)定吸光度值,吸光度與樣本中 GRO-β 的濃度呈正相關(guān),通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,即可精確計(jì)算出樣本中 GRO-β 的含量。
包被抗 CXCL2/GRO-β 單克隆抗體的酶標(biāo)板:是整個(gè)檢測(cè)過(guò)程的核心固相載體,為抗體與樣本中 GRO-β 的結(jié)合提供位點(diǎn)。
人 CXCL2/GRO-β 凍干標(biāo)準(zhǔn)品:用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,通常包含一系列已知濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品,是對(duì)未知樣本進(jìn)行定量分析的重要參照。
CXCL2/GRO-β 檢測(cè)抗體:與結(jié)合在固相抗體上的 GRO-β 特異性結(jié)合,進(jìn)一步完善夾心結(jié)構(gòu)。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:用于將凍干標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度梯度,以滿足制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的需求。
檢測(cè)緩沖液(10×):為整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)提供穩(wěn)定且適宜的緩沖環(huán)境,維持反應(yīng)體系的 pH 值和離子強(qiáng)度,確保檢測(cè)過(guò)程順利進(jìn)行。
底物(TMB):在 HRP 催化下發(fā)生顯色反應(yīng),其顏色變化直觀反映了樣本中 GRO-β 的含量。
終止液:用于終止酶促反應(yīng),使顏色反應(yīng)穩(wěn)定在某一狀態(tài),便于準(zhǔn)確測(cè)定吸光度值。
洗液(20×):在檢測(cè)過(guò)程中多次用于洗滌酶標(biāo)板,有效去除未結(jié)合的物質(zhì),降低非特異性背景干擾,提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
封板膜:在孵育過(guò)程中密封酶標(biāo)板,防止水分蒸發(fā)以及外界雜質(zhì)污染,保證反應(yīng)體系的穩(wěn)定性。
適用的樣本類型廣泛,涵蓋血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等常規(guī)樣本。血清樣本通過(guò)靜脈采血后自然凝固、離心獲得;血漿樣本則需在采血時(shí)加入合適的抗凝劑,離心后取上層血漿。細(xì)胞培養(yǎng)上清是細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中分泌到培養(yǎng)液中的成分,可直接用于檢測(cè)。此外,其他生物學(xué)樣本如尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、組織勻漿等,在經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理后,也能應(yīng)用于該試劑盒的檢測(cè),為不同研究場(chǎng)景和臨床診斷需求提供了多樣選擇。
精密度:板內(nèi)變異系數(shù)一般處于 4.8% - 5.0%,這意味著在同一酶標(biāo)板上進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)時(shí),結(jié)果的一致性良好。板間變異系數(shù)在 3.8% - 4.7%,反映了不同酶標(biāo)板之間檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性,即便使用不同批次的酶標(biāo)板,檢測(cè)結(jié)果也具備較高的可靠性。
靈敏度:通??蛇_(dá)到 0.53pg/ml,能夠檢測(cè)到樣本中極低濃度的 GRO-β,為研究微量表達(dá)的生理或病理狀態(tài)提供了可能。
檢測(cè)范圍:一般為 4.69pg/ml - 300pg/ml,在此濃度區(qū)間內(nèi),試劑盒能夠準(zhǔn)確測(cè)定 GRO-β 的含量,超出該范圍的樣本可能需要進(jìn)行適當(dāng)稀釋或濃縮處理后再檢測(cè)。
回收率:處于 85% - 110%,平均回收率為 0.99,表明試劑盒在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中,能夠較為準(zhǔn)確地回收樣本中已知含量的 GRO-β,驗(yàn)證了其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
在保存方面,試劑盒未拆開(kāi)時(shí),整體應(yīng)放置在 4℃環(huán)境下保存,以維持各試劑的穩(wěn)定性。若試劑盒已拆開(kāi),其中的標(biāo)準(zhǔn)品建議在 - 20℃保存,防止其濃度發(fā)生變化;而其他組件,如檢測(cè)抗體、緩沖液等,仍可在 4℃保存。在運(yùn)輸過(guò)程中,為確保試劑盒性能不受影響,采用 4℃藍(lán)冰運(yùn)輸方式,使試劑盒始終處于低溫、穩(wěn)定的環(huán)境中,避免因溫度波動(dòng)導(dǎo)致試劑失活或性能下降,確保使用者收到的試劑盒能夠正常、準(zhǔn)確地進(jìn)行檢測(cè)工作 。