人生長調(diào)節(jié)致癌基因GRO-α試劑盒
人生長調(diào)節(jié)致癌基因GRO-α試劑盒,通常指人 CXCL1/GRO-α ELISA Kit,以下是具體介紹:
采用雙抗體夾心法。首先將純化的抗人 GRO-α 抗體包被在微孔板上,制成固相抗體。加入含有 GRO-α 的標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本后,樣本中的 GRO-α 會與固相抗體特異性結(jié)合。然后加入 HRP 標(biāo)記的抗 GRO-α 抗體,它會與已結(jié)合在固相抗體上的 GRO-α 進(jìn)一步結(jié)合,形成 “抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體” 復(fù)合物。經(jīng)過che底洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入底物 TMB,在 HRP 酶的催化下,TMB 轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,再加入酸,顏色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。顏色深淺與樣本中的 GRO-α 含量呈正相關(guān),通過酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度值,與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,即可計(jì)算出樣本中 GRO-α 的濃度。
包被抗 CXCL1/GRO-α 單克隆抗體的酶標(biāo)板:為反應(yīng)提供固相載體,使抗體能夠固定在板上與樣本中的 GRO-α 結(jié)合。
人 CXCL1/GRO-α 凍干標(biāo)準(zhǔn)品:用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,包含一系列已知濃度的 GRO-α 標(biāo)準(zhǔn)品。
CXCL1/GRO-α 檢測抗體:與樣本中的 GRO-α 和固相抗體結(jié)合,形成夾心結(jié)構(gòu)。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:用于將凍干標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度梯度,以滿足制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的需求。
檢測緩沖液:為檢測反應(yīng)提供適宜的 pH 值和離子強(qiáng)度等環(huán)境,保證反應(yīng)順利進(jìn)行。
底物(TMB):在 HRP 的作用下發(fā)生顯色反應(yīng),其顏色變化用于反映樣本中 GRO-α 的含量。
終止液:用于終止顯色反應(yīng),使顏色穩(wěn)定,便于準(zhǔn)確測定吸光度值。
洗液:用于洗滌酶標(biāo)板,去除未結(jié)合的物質(zhì),降低背景干擾。
封板膜:在孵育過程中密封酶標(biāo)板,防止水分蒸發(fā)和外界雜質(zhì)污染。
血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集血液,1000×g 離心 15 分鐘,小心分離出血紅細(xì)胞,取上清液。
血漿:可使用 EDTA、檸檬酸鹽、肝素作為抗凝劑,采血后 1000×g 離心 60 分鐘,去除顆粒,取血漿。
細(xì)胞上清液:細(xì)胞培養(yǎng)后,1000×g 離心 32 分鐘,去除顆粒和聚合物,取上清液。
組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,1000×g 離心 33 分鐘,取上清液。若樣本不立即使用,應(yīng)分成小部分在 - 70℃保存,避免反復(fù)冷凍。
不同品牌的試劑盒技術(shù)指標(biāo)略有差異,但一般來說:
精密度:板內(nèi)和板間變異系數(shù)通常在較低水平,以保證檢測結(jié)果的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
靈敏度:可達(dá)到 pg/ml 級別,能夠檢測到樣本中低濃度的 GRO-α。
檢測范圍:有特定的濃度區(qū)間,如 1.56pg/ml - 100pg/ml 等,在此范圍內(nèi)檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確。
回收率:處于較高水平,如 85% - 110%,以驗(yàn)證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。