JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86086-01(10×100ul)/BFNC86086-02(50×100ul)

JM109(DE3)：                                             100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (r_k^-,m_k⁺) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI ^qZΔM15](DE3)

產(chǎn)品說明

JM109(DE3)菌株來源于JM109，用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于JM109的染色體上，所以稱為JM109(DE3)?？赏瑫r(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。JM109(DE3)菌株不可用于藍(lán)白斑篩選試驗(yàn)。

青旗生物生產(chǎn)的JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高于10⁸ cfu /μg DNA。

操作方法

1. JM109(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或

   LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

IPTG配制：

1 M（mol/L）IPTG（分 子 式: C9H18O5S，分 子 量: 238.30）溶液：稱取 2.38 g  IPTG固體，加入8ml ddH2O溶解

補(bǔ)足水到10 ml用0.22um 濾膜過濾除菌，分裝即可。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。

4. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。