瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒
| 參考價 | ￥150.00-￥450.00 |
- 公司名稱 上海尚寶生物科技有限公司
- 品牌其他品牌
- 型號
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2021/1/15 17:12:33
- 訪問次數(shù) 486
| 50次 | 150.00元 | 9999 套 可售 |
| 100次 | 280.00元 | 9999 套 可售 |
| 200次 | 450.00元 | 9999 套 可售 |
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次；100次；200次 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 27101-200 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 純化回收的DNA可直接用于測序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實驗。 |
瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒
產(chǎn)品貨號：27101
產(chǎn)品規(guī)格：200 次
產(chǎn)品簡介：
瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù)和試劑配方，通過*的離心吸附柱快速的結(jié)合 DNA-洗滌-洗脫步驟即可從 普通或低熔點瓊脂糖凝膠中回收純化 70 bp-30 kb 的 DNA 的片段，溶膠速度快，回收率高。溶膠液中含有 pH 指示 劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠回收是否達到適用狀態(tài)。每個吸附柱可吸附高達 10μg 的 DNA，同時有效去除引物、 酶、礦物油、瓊脂糖等雜質(zhì)。純化回收的 DNA 純度及濃度高，完整性好，可直接用于測序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、 體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實驗。
產(chǎn)品內(nèi)容：
自備試劑：
使用前 Buffer PW 50 次加入 36ml 無水乙醇/100 次加入 72ml 無水乙醇/200 次加入 144ml 無水乙醇。
操作步驟：
1. 將單一目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入干凈的離心管（自備）中，稱量計 算凝膠重量（提前記錄離心管重量）。
2. 注意：若膠塊的體積過大，可將膠塊切成碎塊。
3. 向膠塊中加入 2 倍體積 Buffer PG（如凝膠重為 100 mg，其體積可視為 200μl，依此類推）。
4. 57℃水浴溫育，其間每隔 2-3 分鐘溫和地上下顛倒離心管，待溶膠液為黃色，以確保膠塊充分溶解。如果還 有未溶的膠塊，可再補加一些溶膠液或繼續(xù)放置幾分鐘直至膠塊*溶解。
5. （可選步驟）當(dāng)回收片段<300 bp 時，應(yīng)加入 1/2 膠體積的異丙醇，上下顛倒混勻（如凝膠重 100 mg，則加 入 50μl 的異丙醇）。
6. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7. 將步驟 3 或 4 所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收 集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
8. 注意：吸附柱容積為 750μl，若樣品體積大于 750μl 可分批加入。
9. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收 集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
10. 注意：如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分鐘再離心。
11. 重復(fù)步驟 7。
12. 12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液。
13. 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）。
14. 將吸附柱放到一個新的 1.5 ml 離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加 50μl Buffer EB，室溫放置 2 分鐘。12000 rpm 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。
注意：
1. 為了提高 DNA 的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘。
2. 洗脫體積不應(yīng)小于 30μl，體積過少會影響回收效率。
3. 回收大于 10 kb 的 DNA的 片段時，Buffer EB 應(yīng)在 57℃水浴中預(yù)熱，可增加回收效率。
備注：
瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒也適用于 PCR 產(chǎn)物的純化回收。在 PCR 反應(yīng)液中加入等體積的 Buffer PG，充分混勻（對于回收小 于 150bp 的小片段可將溶液的體積增加到 3 倍以提高回收率）接上述步驟 5 進行后續(xù)操作。
注意事項：
1. *使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在 Buffer PW 中加入無水乙醇。
2. 使用前請檢查 Buffer PG，如果出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，可在 37℃水浴中放置 3-5 分鐘，即可恢復(fù)澄清。
3. 電泳時建議使用新的電泳緩沖液，避免影響電泳和回收效果；如下一步實驗要求較高，請盡量使用 TAE 電 泳緩沖液。
4. 切膠時，紫外照射時間應(yīng)盡量短，以免對 DNA 造成損傷。
5. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少，洗脫體積越少，回收率越低。
6. 將水浴鍋預(yù)熱至 57℃。
7. 所有離心步驟均可室溫下進行。
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