人丙酮酸脫氫酶E1試劑盒

人丙酮酸脫氫酶E1試劑盒，是科研領(lǐng)域用于檢測(cè)人體樣本中該酶相關(guān)指標(biāo)的重要工具，在疾病研究、代謝機(jī)制探索等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用 。

• 類型及原理

• ELISA 試劑盒：應(yīng)用雙抗體夾心法，以純化的人丙酮酸脫氫酶 E1 抗體包被微孔板作為固相抗體。加入樣本中的丙酮酸脫氫酶 E1，再與 HRP 標(biāo)記的丙酮酸脫氫酶 E1 抗體結(jié)合，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。che底洗滌后加底物 TMB 顯色，TMB 在 HRP 酶催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，在酸作用下變?yōu)辄S色，顏色深淺與樣品中丙酮酸脫氫酶 E1 含量正相關(guān)。通過(guò)酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD 值），依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度 。

• 免疫組化試劑盒：以 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP - SA）為基礎(chǔ)。一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，生wu素化二抗與一抗特異性結(jié)合，最后加入 HRP - SA，形成抗原 — 特異一抗 — 生wu素化二抗 —HRP - SA 復(fù)合物，可在顯微鏡下對(duì)細(xì)胞、組織內(nèi)的丙酮酸脫氫酶 E1 進(jìn)行定性定位檢測(cè)，呈現(xiàn)出其在組織細(xì)胞中的分布情況 。

• 酶活性檢測(cè)試劑盒：利用丙酮酸脫氫酶 E1 對(duì)特定底物的催化反應(yīng)，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)物生成量（如以丙酮酸為底物生成的乙酰輔/酶 A 量）或底物消耗量，來(lái)精準(zhǔn)反映酶活性高低，助力研究該酶在代謝通路中的功能 。

• 化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒：將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記在抗體或抗原上，當(dāng)與樣本中的丙酮酸脫氫酶 E1 特異性結(jié)合后，引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，且光信號(hào)強(qiáng)度與樣本中丙酮酸脫氫酶 E1 含量成正比，從而實(shí)現(xiàn)高靈敏度、寬范圍的定量檢測(cè) 。

• 樣本處理

• 血清：操作時(shí)避免細(xì)胞刺激，使用無(wú)熱原和內(nèi)毒素試管。血液收集后，以 1000×g 離心 15 分鐘，迅速小心分離血紅細(xì)胞 。

• 血漿：可用 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等抗凝。采集后 1000×g 離心 60 分鐘，去除顆粒 。

• 細(xì)胞上清液：1000×g 離心 32 分鐘，去除顆粒和聚合物 。

• 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎，1000×g 離心 33 分鐘，取上清液用于后續(xù)檢測(cè) 。

• 操作流程

• 加樣與孵育：將處理后的樣本或標(biāo)準(zhǔn)品加入包被抗體的酶標(biāo)板孔，在 37℃等特定溫度孵育，使抗原與包被抗體充分結(jié)合 。

• 洗滌：孵育結(jié)束棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液多次洗板，去除未結(jié)合物質(zhì)，降低非特異性干擾 。

• 加酶標(biāo)抗體與顯色：加入酶標(biāo)抗體繼續(xù)孵育，使其與固相載體上的抗原結(jié)合，之后加入底物溶液，在酶催化下底物顯色 。

• 終止反應(yīng)與讀數(shù)：加入終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)測(cè)定各孔吸光度值，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得出樣本中丙酮酸脫氫酶 E1 的含量或活性 。

• 注意事項(xiàng)

• 試劑盒保存：通常需 2 - 8℃低溫保存，防止反復(fù)凍融，保質(zhì)期一般為 6 個(gè)月左右，使用前檢查是否在有效期內(nèi) 。

• 樣本質(zhì)量：采集樣本時(shí)避免溶血、脂血等情況，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)處理和保存樣本，保障檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確 。

• 操作規(guī)范：嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟操作，精確控制加樣量、孵育時(shí)間、洗滌次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)，避免操作失誤影響結(jié)果 。