細(xì)胞名稱  狗肺成纖維樣細(xì)胞；DogL1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣

品牌 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性家狗的肺組織。1990年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。

培養(yǎng)條件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 15%NBS

傳代方法 1：

2傳代；3-4天一次  

傳代情況 P5

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測(cè) 熒光法（-）　

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

狗肺成纖維樣細(xì)胞；DogL1培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) /FITC 熒光素標(biāo)記 防御素β2抗體(大鼠)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-MAPKK2 /FITC 熒光素標(biāo)記原活化蛋白激酶激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CAGE1/CT3/CT95 /抗原3抗體 規(guī)格 0.2ml

COX-1 (Prostaglandin-endoperoxide synthase-1) 前列腺素氧化環(huán)化酶1抗原 0.5mg

HACE1 英文名稱： E3泛素蛋白連接酶HACE1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Septin 8 細(xì)胞分化蛋白SEPT8抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-MAPKK2 /FITC 熒光素標(biāo)記原活化蛋白激酶激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
LF/LTF (Rabbit Lactoferrin) ELISA Kit 兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 96T

Anti-Cyclin A/FITC 熒光素標(biāo)記周期素A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DAT1/LIM domain only 3 神經(jīng)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子DAT1抗體 規(guī)格 0.2ml

Guinea IgM/PE 熒光素PE標(biāo)記豚鼠IgM 0.1ml

LAIR-1 英文名稱： 白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh ZWINT 著絲粒ZW10相互作用蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Cyclin A/FITC 熒光素標(biāo)記周期素A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml

GPR92 英文名稱： G蛋白偶聯(lián)受體GPR92蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh ANKS3 錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Inhibin Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記抑制素α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-ROCK2/FITC 熒光素標(biāo)記Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Human leukotriene E4,LT-E4 ELISA Kit 人白三烯E4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-SARS putative orflab polyprotein 抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GRB10 生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10抗體 規(guī)格 0.2ml

DPD ELISA Kit 大鼠脫氧酚/脫氧啉 96T

Os05g0477200 protein 英文名稱： 水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體 1ml

phospho-Bcl-xL (Thr47) 英文名稱： 磷酸化Bcl-xL蛋白抗體 0.1ml

Anti-SARS putative orflab polyprotein 抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。