Human TNF-α ELISA Kit是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿、細(xì)胞或組織裂解液、或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-1β的ELISA試劑盒。
      本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，zui小檢出量為2.2pg/ml，與人IL-1rα、IL-1sRII、IL-1sRI、小鼠IL-1α、小鼠IL-1β等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
      IL-1即白細(xì)胞介素-1(簡稱白介1)，其家族由IL-1α(也稱IL-1F1)、IL-1β(也稱IL-1F2)、IL-1受體拮抗劑(IL-1 receptor 
antagonist, 簡稱IL-1RA, 或IL-1F3)及IL-18、IL-33和IL-1F5~F10組成。IL-1主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，此外幾乎所有的有核細(xì)胞，如B細(xì)胞、NK細(xì)胞、體外培養(yǎng)的T細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、星形細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞均可產(chǎn)生IL-1。正常情況下只有皮膚、汗液及尿液中含有一定量的IL-1，絕大多數(shù)細(xì)胞在受到外來抗原或細(xì)菌內(nèi)毒素刺激后才能合成和分泌IL-1。IL-1β在免疫和炎癥反應(yīng)、骨重建(bone remodeling)、發(fā)燒、碳水化合物代謝等生理、病理過程中都有重要作用。血液中的IL-1主要是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的IL-1β。
      IL-1α和IL-1β在結(jié)構(gòu)上有一定的相似性并且在氨基酸水平有25%的同源性。兩者由不同的基因分別編碼產(chǎn)生約31kDa大小的前體蛋白，并分別剪切成約17.5kDa大小的成熟蛋白。IL-1α的前體蛋白有一定的生物活性，而IL-1β的前體蛋白幾乎沒有生物學(xué)功能，所以其被Caspase-1/ICE剪切得到成熟的IL-1β是一個非常關(guān)鍵的步驟。在大多數(shù)情況下，IL-1α和IL-1β以同樣的親和力結(jié)合于相同的細(xì)胞表面受體，發(fā)揮相同的生物學(xué)作用。IL-1有兩種跨膜受體蛋白，一種是分子量約為80kDa的IL-1 RI (IL-1 
receptor, type I)，其主要表達(dá)在T細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肝細(xì)胞中；另一種是分子量約為68kDa的IL-1 RII (IL-1 receptor, type II)，其主要表達(dá)在B細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及骨髓細(xì)胞中。
      IL-1主要激活NF-κB信號通路調(diào)控炎癥因子的表達(dá)。IL-1和其受體結(jié)合后，激活下游一系列蛋白如JNK、p38、ERK1/2，及NF-κB和c-Jun。IL-1的信號通路見圖1。

Human TNF-α ELISA Kit采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。zui后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

      一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
PI305-1    人IL-1β抗體預(yù)包被板    8孔×12條
PI305-2    樣品分析緩沖液    5ml
PI305-3    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    10ml
PI305-4    人IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品    2-4瓶
PI305-5    人IL-1β生物素化抗體    10ml
PI305-6    辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin    10ml
PI305-7    洗滌液(20X)    30ml
PI305-8    TMB溶液    10ml
PI305-9    終止液    5ml
PI305-10    封板膜(透明)    2張
PI305-11    封板膜(白色)    2張
－    說明書    1份
Human TNF-α ELISA Kit保存條件：
      除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。注意TMB溶液避光保存。
注意事項：
      由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
      洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。
      為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
      TMB對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
      如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍(lán)色，應(yīng)該停止使用。
      加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
      不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
      充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
      本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致zui終檢測到的吸光度顯著下降。
      洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
      檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
      加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
      Human TNF-α ELISA Kit僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。